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考馬斯亮藍(lán)法測蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點(diǎn)是:
?。?)靈敏度高,據(jù)估計比Lowry法約高四倍,其zui低蛋白質(zhì)檢測量可達(dá)1mg。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大,蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù),因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多。
(2)測定快速、簡便,只需加一種試劑。完成一個樣品的測定,只需要5分鐘左右。由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過程,大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時內(nèi)保持穩(wěn)定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩(wěn)定性。因而*不用像Lowry法那樣費(fèi)時和嚴(yán)格地控制時間。
?。?)干擾物質(zhì)少。如干擾Lowry法的K、Na、Mg2離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、巰基乙醇、EDTA等均不干擾此測定法。
考馬斯亮藍(lán)法測蛋白質(zhì)含量的缺點(diǎn)是:
(1)由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白質(zhì)測定時有較大的偏差,在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時通常選用g—球蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),以減少這方面的偏差。
?。?)仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定,主要的干擾物質(zhì)有:去污劑、TritonX-100、十二烷基硫酸鈉(SDS)和0.1N的NaOH。(如同0.1N的酸干擾Lowary法一樣)。
(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線也有輕微的非線性,因而不能用Beer定律進(jìn)行計算,而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定未知蛋白質(zhì)的濃度。