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廈門慧嘉生物科技有限公司
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產(chǎn)品型號人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒
品 牌
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所 在 地廈門市
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更新時間:2018-05-07 14:23:11瀏覽次數(shù):631次
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廈門慧嘉生物*經(jīng)營人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒。誠信經(jīng)營,價格實惠,服務(wù)周到,質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來詢!: :
產(chǎn)品名稱: 人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA Kit
產(chǎn)品英文: Human Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格: 96T
產(chǎn)品類別: 人心肌梗塞類ELISA試劑盒[Human cardiomyopathy ELISA Kit
人肌紅蛋白(MYO/MB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究研究使用
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體中MB含量。
概述
Mb是一種氧結(jié)合血紅素蛋白,分子量17,800道爾頓,主要分布于心肌和骨骼肌組織,在急性心肌梗塞(AMI)時,心肌細胞壞死,Mb稀放入血液中。在癥狀出現(xiàn)約2~3小時后,血中Mb可超出正常上限,9~12小時達到峰值,24~36小時后恢復(fù)正常。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中MB水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入MB、*化的抗人MB抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MB呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
試劑盒組成
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,其濃度為250 ng/mL,做系列倍比稀釋后,分別稀釋成250 ng/mL,125 ng/mL ,62.5 ng/mL,31.2 ng/mL,15.6 ng/mL,7.8 ng/mL,3.9 ng/mL,其原液直接作為zui高標準濃度,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 mg/mL,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
3. 樣品稀釋液:1×10ml/瓶。
4. 抗體稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 抗體稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以抗體稀釋液A1:100稀釋。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以抗體稀釋液B1:100稀釋。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
標本的采集及保存
1.細胞培養(yǎng)物上清:請離心后收集上清,并將標本保存于-20℃,且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血清:標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外,余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul,輕輕混勻,37℃,120分鐘。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。
3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul,37℃,60分鐘。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul,37℃,60分鐘,洗板5次,甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色30分鐘。
6. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
注:
1. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
2.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層
吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
特異性
本試劑盒可同時檢測重組或天然的人MB,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
計算
以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
2. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
3. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。
4. 如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
5.在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
6.底物請避光保存。
檢測范圍:
0.3 ng/mL -500 ng/mL
說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。而且,洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。
3. 試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期:6個月
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