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廈門慧嘉生物科技有限公司


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ELISA試劑盒96T 人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-04-06 23:45:09瀏覽次數(shù):330次

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產(chǎn)品簡介

廈門慧嘉生物*經(jīng)營人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒。誠信經(jīng)營,價格實惠,服務(wù)周到,質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來詢!: :

詳細介紹

 廈門慧嘉生物*經(jīng)營ELISA試劑盒及Santa/Abcam抗體、Prospec細胞因子、Sigma/Amresco/Qiagen、Axygen耗材等生物試劑產(chǎn)品。實驗為大,誠信經(jīng)營,為客戶提供“zui高質(zhì)量的產(chǎn)品”和“的服務(wù)”。歡迎廣大老師來詢!:   :  1048735792 或登陸http://www.biohj.com/(向客服人員索取原版說明書)

產(chǎn)品名稱: 人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA Kit
產(chǎn)品英文: Human papillomavirus antibody IgM,HPV-IgM ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格: 96T
產(chǎn)品類別: 人性傳播疾病類ELISA試劑盒[Human venereal disease ELISA Kit]

人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
                                                                                 
本試劑盒僅供體外研究使用!
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)含量。

實驗原理
用純化的抗原包被微孔板,制成固相載體,往包被抗原的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗原、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HPV-IgM呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品:2瓶,每瓶臨用前以0.8ml樣品稀釋液稀釋,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100 U/L,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,1.56 U/L,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 U/L,臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制50 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml。
6. 檢測溶液A:1×120μl(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(100μl/孔),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B:1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11. 覆膜:5張
12. 使用說明書:1份

自備物品
1.   酶標(biāo)儀(建議參考儀器使用說明提前預(yù)熱)
2.   微量加液器及吸頭,EP管
3.   蒸餾水或去離子水,全新濾紙

標(biāo)本的采集及保存
1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,-20℃不應(yīng)超過1個月,-80℃不應(yīng)超過2個月;標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。

操作步驟
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進行檢測。

注:
1.  試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

洗板方法
1.  手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
2.  自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人HPV-IgM,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),OD值為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),在對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,如curve expert 1.3,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

檢測范圍:1.56 U/L - 100 U/L

zui低檢測限:0.78 U/L

說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且,洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。
3. 試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
4. 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準(zhǔn)。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期:6個月

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