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高品質(zhì)96T 人胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2018-05-17 07:35:24瀏覽次數(shù):489次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

廈門(mén)慧嘉生物*經(jīng)營(yíng)人胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒。誠(chéng)信經(jīng)營(yíng),價(jià)格實(shí)惠,服務(wù)周到,質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來(lái)詢(xún)!: :

詳細(xì)介紹

廈門(mén)慧嘉生物*經(jīng)營(yíng)ELISA試劑盒及Santa/Abcam抗體、Prospec細(xì)胞因子、Sigma/Amresco/Qiagen、Axygen耗材等生物試劑產(chǎn)品。誠(chéng)信經(jīng)營(yíng),為客戶(hù)提供“zui高質(zhì)量的產(chǎn)品”和“的服務(wù)”。歡迎廣告老師來(lái)詢(xún)!:   :  1048735792 或登陸http://www.biohj.com/download.aspx(向客服人員索取原版說(shuō)明書(shū))

人胰高血糖素(GC)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用

檢測(cè)范圍:20 pg/ml -400 pg/ml
特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的人GC,且與其他相關(guān)物質(zhì)無(wú)交叉反應(yīng)。
有效期:6個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中GC含量。
說(shuō)明
1.試劑盒保存:-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí))。
2.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3.中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不*之處,請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
4.剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的另一株單抗,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物顯色。顏色的深淺和樣品中的GC呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):4瓶(凍干品)。

標(biāo)準(zhǔn)品 S1 S2 S3 S4
濃度(pg/ml) 20 80 180 400

3. 酶結(jié)合物(HRP-conjugate):1×6ml/瓶。
4. 底物溶液A(Substrate A):1×7ml/瓶。
5. 底物溶液B(Substrate B):1×7ml/瓶。
6. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×15ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋20倍。
7. 終止液(Stop Solution):1×7ml/瓶(2N H2SO4)。

需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
標(biāo)本的采集及保存
1. 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000 g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
標(biāo)本的稀釋原則:
首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍內(nèi),檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N”倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:4瓶,每瓶臨用前以蒸餾水稀釋至0.5ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如樣品濃度過(guò)高時(shí),*行稀釋?zhuān)允箻悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓撞患尤魏稳芤?,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品50μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
2. 每孔加酶結(jié)合物50μl(空白孔除外),充分混勻,37℃, 120分鐘。
3. 溫育后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,甩干。
4. 依序每孔加底物溶液A和B各50μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔顯色不明顯,即可終止)。
5. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
注:
1. 用戶(hù)在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于2-8℃保存。
5. 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
3. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 底物請(qǐng)避光保存。
7. 不要用其它生產(chǎn)廠(chǎng)家的試劑替換試劑盒中的試劑

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