1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
據(jù)標(biāo)準(zhǔn)GB/T14931.1-94測定畜禽肉中*、四環(huán)素、*殘留量。zui低檢出濃度為：0.15，0.20，0.65mg/kg。
2.試驗(yàn)原理
樣品經(jīng)提取，微孔濾膜過濾后直接進(jìn)樣，用反相液相色譜分離，紫外檢測器檢測，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量，出峰順序?yàn)?、四環(huán)素、*。標(biāo)準(zhǔn)加法定量。
3.試劑
3.1 乙腈（分析純）。
3.2 0.01mol/L*溶液：稱取1.56 g（±0.01g）*（NaH2PH4.2H2O）溶于蒸餾水中，定容到100 mL，經(jīng)過濾器過濾（選用微孔濾膜為0.45 μm），備用。
3.3 *（OTC）標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取*0.0100g（±0.0001g），用0.1mol/L鹽酸溶液每毫升含*1mg。
3.4 四環(huán)素（TC）標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取四環(huán)素0.0100g（±0.001g），用0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定容10.00 mL，此溶液每毫升含四環(huán)素1mg。
3.5 *（CTC）標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取*0.0100g（±0.0001g），溶于蒸餾水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含*1mg。以上標(biāo)準(zhǔn)品均按1000單位/mg折算。3.3～3.5溶液應(yīng)于4℃以下保存，可使用1周。
3.6 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：取3.3、3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.00mL，取3.5標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00mL，置于10mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含*、四環(huán)素各0.1mg，*0.2mg，臨時現(xiàn)配。
3.7 5％高氯酸溶液。
4.儀器
4.1 液相色譜儀（HPLC）：具紫外檢測器。
4.2 振蕩器：天津市恒奧科技發(fā)展有限公司
4.3 過濾器：天津市恒奧科技發(fā)展有限公司
4.4 超聲波：天津市恒奧科技發(fā)展有限公司
5.色譜條件
5.1 液相色譜柱：ODS-C18 （5 μm） 6.2mm×15 cm。
5.2 檢測波長：355nm。
5.3 靈敏度：0.002AUFS。
5.4 柱溫：室溫。
5.5 流速：1.0mL/min。
5.6 進(jìn)樣量：10 μL。
5.7 流動相：乙腈/0.01mol/L*溶液（用30％（V/V）硝酸溶液調(diào)節(jié)pH2.5），35：65（V/V），使用前用超聲波脫氣10min。
6.操作方法
6.1 樣品測定：稱取5.00 g（±0.01 g）切碎的肉樣（＜5 mm），置于50mL錐形燒瓶中，加入5％高氯酸25.0mL，于振蕩器上振蕩提取10min，移入到離心管中，以2000 r/min離心3min，取上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，取溶液10μL進(jìn)樣，記錄峰高，從工作曲線上查得含量。
6.2 工作曲線：分別稱取7份切碎的肉樣，每份5.00 g（±0.01 g），分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0、25、50、100、150、200、250 μL（含*、四環(huán)素各為0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μg， 含*0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 μg）， 按6.1方法操作，以峰高為縱坐標(biāo)，以抗生素含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。
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