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技術(shù)文章

液相色譜實驗技術(shù)問題解答

閱讀:1120發(fā)布時間:2010-6-28

A-01000  小鼠抗3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體)  Anti-GAPDH(mouseAnti-GAPDHMonoclonal)        
A-01001  β-肌動蛋白抗體(內(nèi)參抗體)  Anti-β-Actin        
A-01002  14-3-3 蛋白抗體   Anti-14-3-3protein        
A-01003  14-3-3蛋白抗體(植物)  Anti-14-3-3 familyprotein(Malus domestica (Apple) (Malussylvestris))        
A-01004  2,4-二氯苯氧乙酸/除草劑/激素型除草劑抗體  Anti-2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid)        
A-01005  2,4-二氯苯氧乙酸/除草劑/激素型除草劑單克隆抗體  Anti-2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid)        
A-01006  5-羥色胺抗體  Anti-5-HT(5-hydroxytryptamine)        
A-01007  5-羥色胺受體1A抗體  Anti-5-HTR1A (5-HT1A(5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1;ADRB2RL1;HTR1A)        
A-01008  5-羥色胺受體1B(5-HT/serotoninR1B)抗體  Anti-5-HTR1B (5-hydroxytryptamine/serotoninreceptor 1B)        
A-01009  5-羥色胺受體2B(5-HT/serotoninR2B)抗體  Anti-5-HTR2B(5-hydroxytryptamine(serotonin)receptor2B)        
A-01010  5-羥色胺受體2A抗體  Anti-5-HTR2A        
A-01011  5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體  Anti-5-HTT/SERT(Serotoninreuptaketransporter)        
A-01012  5-羥色胺受體3抗體  Anti-5-HTR3(5-hydroxytryptamine(serotonin) receptor3a)        
A-01013  5-羥色胺受體4抗體  Anti-5-HTR4(5hydroxytryptamine serotonin receptor4)        
A-01014  5-脂氧合酶抗體  Anti-5-LOX(5-lipoxygenase)        
A-01015  8-羥基脫氧鳥苷抗體  Anti-8-OHdG(8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine;8-Hydroxydeoxyguanosine)        
1、液相色譜是如何實現(xiàn)、快速、靈敏的?

解:氣相色譜理論和技術(shù)上的成就為液相色譜儀的發(fā)展創(chuàng)造條件,從它的、高速和高靈敏渡得到啟發(fā),采用5一10四微粒出定相以提高柱效,采用高壓泵加快液體流動相的流速;設(shè)計高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測器,提高檢測靈敏度,克服經(jīng)典液相色譜曲缺點(diǎn),從而達(dá)到、快速、靈敏。

2、與氣相色譜法相比液相色譜有哪些優(yōu)點(diǎn)和不足?

解:氣相色譜的分析對象是在校溫下具有一定的揮發(fā)性、對熱穩(wěn)定購物質(zhì)。因此它只限于分析氣體和沸點(diǎn)低的化合物或揮發(fā)性的衍生物。而液相色譜由于以液體作為流動相,只要被分析的物質(zhì)在選用的流動相中有一定的按解度,便可以分析,所以適用性廣,不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,特別適合于那些沸點(diǎn)高、極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差的化合物,例如,生化物質(zhì)和藥物、離子型化合物、熱穩(wěn)定性差的天然產(chǎn)物等。在目前已知的有機(jī)化臺物中,

只有20%樣品可不經(jīng)化學(xué)處理而能滿意地用氣相色譜分離,80%的有機(jī)化合物要用液相色譜分析。

氣相色譜儀中流動相是惰性的,它對組分沒有作用力,僅起運(yùn)載作用、而液相色譜的流動相不僅起運(yùn)載作用,而且流動相對組分有一定親合力,可以通過改變流動相種類和組成提高分離的選擇性,另外可作流動相的化合物多,選擇余地廣。

與氣相色譜相比,液相色譜的另一個優(yōu)點(diǎn)是樣品的回收比較容易,只要開口容器放在柱子末端,就可以很容易地將所分離的各組分收集。回收是定量的,可以用來提純和制備具有足夠純度的單一物質(zhì)。

液相色譜不足的是,日前檢測器的靈敏度不及氣相色譜。必須特別注意“柱外效應(yīng)”對柱效率及色譜分離的影響。

3、試比較氣相色譜與液相色譜的H-u曲線,分析產(chǎn)生不同的原因。

解:可看出,氣相色譜和液相色譜得到的H-u曲線,形狀迥然不同,流動相的流速對柱效的影響也不一樣,在氣相色譜的H-u曲線上,塔板高度H隨u變化呈雙曲線.曲線有一zui低點(diǎn),這時柱效zui高,板高zui小,流速*。而液相色譜H-u曲線,未出現(xiàn)流速降低板高增加的現(xiàn)象,由于*流速趨近于零,一般觀察不到zui低板高相對應(yīng)的*流速。在正常的情況下,流速降低,板高H總是降低的,這與氣相色譜明顯不同。在氣相色譜中流動相流速增大,柱效呈直線降低,而在液相色譜中,流動相流速增大,柱效平緩降低。其主要原因是液相色譜的流動相為液體,液相的擴(kuò)散系數(shù)Dm很小,通常僅為氣相擴(kuò)散系數(shù)的104~105分之一,所以分子擴(kuò)散項在低u時也不起多大作用、因此液相色譜H-u曲線未能出現(xiàn)流速降低,板高增加現(xiàn)象。到高速時,雖然柱內(nèi)線速提高,但固定相和流動相的傳質(zhì)都能很快進(jìn)行,故H-u曲線上升緩慢。

4、簡述液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素,如何減少諳帶擴(kuò)張、提高柱效?

解:液相色譜中引起色諾峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動相傳質(zhì)、停留流動相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。

在液相色譜中要減小譜帶擴(kuò)張,提高柱效,要減少續(xù)料顆粒直徑,減小境料孔穴深度,提高裝填的均勻性,采用低粘度溶劑作流動相,流速盡可能低,同時要盡可能采用死體積較小的進(jìn)樣器、檢測器、接頭和傳輸管線等。

5、為什么要提出折合參數(shù)?有何特點(diǎn)?

解:我們知道色譜操作條件對板高是有影響的.Giddings發(fā)現(xiàn),固定相相同,填充良好,共是粒度dp不同,因而H-u曲線不同,在液相色譜中,培板高度是粒度的函數(shù),為了比較不向色譜條件下的板高H.提出折合參數(shù),包括折合板高、折合流速、折合柱長。其特點(diǎn)是對于不同粒度的填料能得到相同的H—ur曲線,因此可以在相同的條件下比較不同填料的柱效。

6、液相色譜柱A長度為15cm,載體粒度為5m.另一B柱長為30cm,載體粒度為10m,兩柱的柱效相等嗎?

解:A柱的折合柱長為30000,B柱的折合柱長也為30000,表明組分在兩根柱內(nèi)從柱人口到出口都經(jīng)過30000個載體顆粒.兩校的柱效相等。

7、何謂梯度淋洗,適用于哪些樣品的分析?與程序升溫有什么不同?

解:梯度淋洗就是在分離過程中.讓流動相的組成、極性、pH值等按‘定程序連續(xù)變化。使樣品中各組分能在*的k下出峰。使保留時間短、擁擠不堪、甚至重疊的組分,保留時間過長而峰形扁平的組分獲得很好的分離,特別適合樣品中組分的k值范圍很寬的復(fù)雜樣品的分析。梯度淋洗十分類似氣相色譜的程序升溫,兩者的目的相同。不同的是程序升溫是通過程序改變柱溫。而液相色譜是通過改變流動相組成、極性、pH值來達(dá)到改變k的目的。

8、流動相為什么要預(yù)先脫氣?常用的脫氣方法有哪幾種?

解:流動相中溶解氣體存在以下幾個方面的害處,氣泡進(jìn)入檢測器,引起光吸收成電信號的變化,基線突然跳動,干擾檢測;溶解在溶劑中的氣體進(jìn)入色譜柱時,可能與流動相或固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng);溶解氣體還會引起某些樣品的氧化降解.對分離和分析結(jié)果帶來誤差。因此,使用前必須進(jìn)行脫氣處理。常用的脫氣法有以下幾種:(1)加熱脫氣法;(2)抽吸脫氣法;(3)吹氦脫氣法;(4)超聲波振蕩脫氣法。

9、按固定相孔徑大小分類,液相色譜固定相有哪幾類?各有什么特性及適用范圍?

解:從固定相的孔隙深度考慮,液相色譜固定相分為表面多孔型(薄殼型)和全多孔型(全孔型)兩類。

表面多孔型固定相多孔層厚度小.孔淺,相對死體積小,出峰迅速,柱效高,顆粒較大,滲透性好,由于孔淺,梯度淋洗時,當(dāng)流動相成分改變后.孔內(nèi)外流動相成分能迅速達(dá)到平衡,機(jī)械強(qiáng)度高,裝柱容易,其不足的是由于多孔層厚度小,因而柱容量小,zui大允許樣品量受到限制,適用于比較簡單的樣品分析及快速分析。
 


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