【摘要】 目的建立*膠囊中淫羊藿苷的含量測定方法。方法采用液相色譜（HPLC）法，ODS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-水（30∶70）為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min，檢測波長270 nm。結(jié)果淫羊藿苷在10.92～65.52 μg·ml-1的進(jìn)樣濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為99.30%（RSD=0.45%,n=6）。結(jié)論方法操作簡便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于*膠囊的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】 液相色譜；*膠囊；淫羊藿苷
Abstract:ObjectiveTo establish the content determinationmethod of Icariin in Ruhe Sanjie capsules by HPLC. MethodsHPLCanalysis was carried out at the following conditions: Cromasil C18column（4.6 mm×250 mm,5 μm）, phase:Acetonitrile-Water（v/v）=30:70,the detection wavelength at 270 nm,the flow rate at 1.0ml·min-1. ResultsThe standard curve was linear over the range of10.92～65.52 μg·ml-1 （r=0.999 9）,and the average recovery was 98.30%with RSD of 0.45%（n=6）;ConclusionThe method is simple,sensitive andaccurate,and available for control of Ruhe Sanjie Capsules.
Key words:HPLC; Ruhe Sanjie Capsules; Icariin
*［1］膠囊具有舒肝解郁、軟堅(jiān)散結(jié)、理氣活血的功效。全方由當(dāng)歸、黃芪、光慈姑、漏蘆、柴胡、郁金、昆布、海藻、淫羊藿、鹿銜草10味藥組成，臨床用于治療乳腺囊性增生、乳痛癥、乳腺纖維腺瘤和男性乳房發(fā)育異常等。而該品種沒有《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，部頒標(biāo)準(zhǔn)中也只有薄層定性鑒別，沒有其主要有效成分的含量測定方法。其主要組成藥物淫羊藿為小檗科科植物淫羊藿Epimediumbrevicornum Maxim.、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum（Sieb. etZucc.）Maxim.、柔毛淫穢羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimediumwushanense T.S.Ying、或朝鮮淫羊藿Epimedium koreanumNakai的干燥地上部分，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕等功效，《中國藥典》2005版Ⅰ部已載有淫羊藿苷的含量測定方法。因此，建立液相色譜法測定*膠囊中主藥淫羊藿的指征成分淫羊藿苷的含量就尤為必要。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定淫羊藿苷的含量，以期為*膠囊的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供較為科學(xué)的依據(jù)。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
島津液相色譜（LC-10AVP泵、SPD-10AVP紫外檢測器）；2010色譜管理系統(tǒng)。
1.2 試藥
淫羊藿苷對(duì)照品（110737-200312，中國藥品生物制品檢定所）；*膠囊（自制，批號(hào)20050915，規(guī)格0.4g/粒）；超純水；乙腈為色譜純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件色譜柱為ODS C18液相色譜柱（SHIMADZU，4.6mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-水（30∶70）；檢測波長270 nm；體積流量1.0 ml/min；柱溫為室溫。
2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取于105℃干燥至恒重的淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.04mg淫羊藿苷的溶液，即得。
2.3 供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物0.1 g，精密稱定，置50 ml具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理1 h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻離心，上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.4 專屬性實(shí)驗(yàn)取淫羊藿苷對(duì)照品、*膠囊供試品溶液、不含淫羊藿的空白溶液，依法進(jìn)樣測定，結(jié)果在淫羊藿苷保留時(shí)間處無干擾峰影響（對(duì)照品、供試品和陰性圖譜見圖1～3）。
2.5 線性關(guān)系的考察精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品10.92 mg，置100ml量瓶，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml對(duì)照品母液到10ml容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。再分別精密吸取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以淫羊藿苷的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y =22 534+1293.6X, r=0.999 9。淫羊藿苷在10.92～65.52μg·ml-1的進(jìn)樣濃度范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系（線性回歸曲線見圖4）。
2.6 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取*膠囊供試品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果淫羊藿苷的平均峰面積為955523，RSD為0.94%（n=6）。
2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品制備供試品溶液，分別于0，2，4，8 h進(jìn)樣20μl，進(jìn)行穩(wěn)定性考察，結(jié)果RSD為0.12%。表明8h供試品溶液內(nèi)的淫羊藿苷穩(wěn)定。
2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，精密稱取5份，按正文方法制備供試品溶液，在相同色譜條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果淫羊藿苷的平均含量為2.47mg/粒，RSD為0.19%。
2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取6份已知含量的樣品（批號(hào)20050915，含量為2.47mg/粒，平均粒重為0.402 2 mg/粒）各0.05 g，精密加入淫羊藿苷對(duì)照品溶液（0.109 2 mg/ml）6.0ml，按樣品含量測定項(xiàng)下的方法操作，記錄色譜圖，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1，其平均回收率為99.30%，RSD為0.45%（n=6）
表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
2.10 樣品含量測定取3批樣品各0.1g，精密稱定，依法制成供試品溶液，均以20μl進(jìn)樣，分別測定吸收峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算淫羊藿苷含量。結(jié)果見表2。表2 樣品含量測定結(jié)果（略）
3 討論
在提取條件的篩選中，采用了50%甲醇、稀乙醇［2］、95%乙醇分別進(jìn)行超聲處理1h的比較，指標(biāo)成分測定結(jié)果差異很小?？紤]到溶劑毒性，所以選擇了稀乙醇超聲提取。
實(shí)驗(yàn)采用HPLC法能達(dá)到有效分離各組分的目的，且陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)證明在色譜峰處其他成分無干擾。本法具有靈敏度高、操作簡單、分離效果好等優(yōu)點(diǎn)，可作為*膠囊的含量測定質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
【參考文獻(xiàn)】
?。?］中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-3423-98［S］.
?。?］國家藥典委員會(huì).中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：229.
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