【摘要】目的測(cè)定地骨*中腺苷的含量。方法采用液相色譜。色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6m，5μm）；磷酸鹽緩沖液（pH6.8取0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml。加0.2mol／L氫氧化鈉溶液118ml，用水稀釋至lO00ml，即得）-四氫呋喃（99：1）為流動(dòng)相，流速：1.Oml／min；檢測(cè)波長(zhǎng)20Onm。結(jié)果腺苷在0.05～0.5 μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，平均回收率為96.87％，RSD=1.65％。結(jié)論該法可用于地骨*中腺苷的含量測(cè)定。
【關(guān)鍵詞】地骨*；冬蟲夏草；腺苷；液相色譜法
*由郁金、地骨皮、冬蟲夏草等六味藥組成，具有滋陰潤(rùn)燥、化瘀通絡(luò)的功能，用于治療陰虛血瘀所引起的消渴、Ⅱ型糖尿病見上述證候者具有較好的療效。方中冬蟲夏草為主藥，其有效成分為腺苷，我們采用HPLC法測(cè)定了*中腺苷的含量，該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高，可很好的控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。
1 儀器與試藥
LC-2010A液相色譜儀、PDA-lOAvp檢測(cè)器（日本Shimazu公司），SB5200*（上海Branson公司）；腺苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用）；地骨*及陰性空白（青海省金訶藏藥廠）；四氫呋喃（色譜純）；水為超純水；其余試劑均為分析純。
2 色譜條件
Kromasil C18液相色譜柱（250mmx4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（pH6.8取0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol／L氫氧化鈉溶液118ml，用水稀釋至lO00ml，即得）-四氫呋喃（99：1），流速：1.Oml／min；檢測(cè)波長(zhǎng)26Onm。
3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
3．1樣品溶液的制備取本品內(nèi)容物（約相當(dāng)于4粒），精密稱定，加9O％甲醇lOml，精密稱定，超聲處理20min，放冷，加90％甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液。用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。另取不含冬蟲夏草的陰性對(duì)照品，同法制成陰性對(duì)照溶液。
3．2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取腺苷對(duì)照品，加90％甲醇制成0.O15mg/ml的對(duì)照品溶液。
3．3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取供試品，陰性空白樣品及對(duì)照品溶液，照2項(xiàng)色譜條件，各進(jìn)樣lOμl，測(cè)得HPLC圖譜。圖譜表明陰性對(duì)照色譜沒有干擾。理論塔板數(shù)按腺苷峰計(jì)算不低于3OOO。
3．4 線性關(guān)系的考察精密稱取腺苷對(duì)照品，加90％甲醇制成0.05mg/ml的溶液，精密吸取上述溶液1、2、4、6、8、lOml于lOml容量瓶中加90％甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進(jìn)樣1Oμl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積值為縱坐標(biāo)，腺苷量（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算的回歸方程為：Y=3806623X+6617r=0.9998。
表明腺苷在0.05～0.5μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。
3．5精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD為1.82％。
3．6穩(wěn)定性試驗(yàn)取配制好的對(duì)照品溶液在0、1、2、4、6、8h分別進(jìn)樣1Oμl，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為1.94％?？梢姽┰嚻啡芤涸?h內(nèi)穩(wěn)定。
3．7重現(xiàn)性試驗(yàn)取*（批號(hào)為20010710），平行6份樣品，按樣品測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果每粒含腺苷分別為0.042mg,O.04lmg、0.04mg、0.043mg、0.042mg、0.040mg（RSD=2.52％，n=6）表明本法重現(xiàn)性較好。
3．8回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已測(cè)知含量的*（批號(hào)20010710含量為0.041mg／粒）樣品6份，精密稱定，分別精密加入腺苷適量，按樣品溶液制備項(xiàng)下操作，依法制備、進(jìn)樣、記錄色譜圖、計(jì)算回收率。
3．9 樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品與樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中腺苷的含量。
4 討論
4．1制劑中腺苷的含量測(cè)定方法主要有薄層掃描法、分光光度法、液相色譜法、毛細(xì)管電泳法等。本文選用HPLC法測(cè)定地骨*中腺苷的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高，可很好的控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。
4．2地骨*為中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，試驗(yàn)中曾試用15％四氫呋喃的磷酸鹽緩沖溶液；甲醇-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（13：87）、6％乙腈、磷酸鹽緩沖液（pH6.8取0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol／L氫氧化鈉溶液l18ml，用水稀釋至1000ml，即得）-四氫呋喃（99：1）等多種溶劑系統(tǒng)進(jìn)行分離，確定以磷酸鹽緩沖液（pn6.8取O.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol幾氫氧化鈉溶液l18ml，用水稀釋至1000ml，即得）-四氫呋喃（99：1）為流動(dòng)相，腺苷的分離良好，陰性對(duì)照沒有干擾。
4．3樣品溶液的制備，試驗(yàn)中曾分別用90％甲醇進(jìn)行了回流、冷浸、超聲波提取三種提取方法的考察．結(jié)果表明三者提取效果基本相同，因超聲波提取法簡(jiǎn)便、快速，故選擇超聲波提取法制備樣品溶液。
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