【摘要】目的測定地骨*中腺苷的含量。方法采用液相色譜。色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6m，5μm）；磷酸鹽緩沖液（pH6.8取0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml。加0.2mol／L氫氧化鈉溶液118ml，用水稀釋至lO00ml，即得）-四氫呋喃（99：1）為流動相，流速：1.Oml／min；檢測波長20Onm。結(jié)果腺苷在0.05～0.5 μg范圍內(nèi)具有良好線性關系，平均回收率為96.87％，RSD=1.65％。結(jié)論該法可用于地骨*中腺苷的含量測定。
【關鍵詞】地骨*；冬蟲夏草；腺苷；液相色譜法
*由郁金、地骨皮、冬蟲夏草等六味藥組成，具有滋陰潤燥、化瘀通絡的功能，用于治療陰虛血瘀所引起的消渴、Ⅱ型糖尿病見上述證候者具有較好的療效。方中冬蟲夏草為主藥，其有效成分為腺苷，我們采用HPLC法測定了*中腺苷的含量，該法簡便、準確，靈敏度高，可很好的控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。
1 儀器與試藥
LC-2010A液相色譜儀、PDA-lOAvp檢測器（日本Shimazu公司），SB5200*（上海Branson公司）；腺苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用）；地骨*及陰性空白（青海省金訶藏藥廠）；四氫呋喃（色譜純）；水為超純水；其余試劑均為分析純。
2 色譜條件
Kromasil C18液相色譜柱（250mmx4.6mm，5μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（pH6.8取0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol／L氫氧化鈉溶液118ml，用水稀釋至lO00ml，即得）-四氫呋喃（99：1），流速：1.Oml／min；檢測波長26Onm。
3 實驗方法與結(jié)果
3．1樣品溶液的制備取本品內(nèi)容物（約相當于4粒），精密稱定，加9O％甲醇lOml，精密稱定，超聲處理20min，放冷，加90％甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液。用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。另取不含冬蟲夏草的陰性對照品，同法制成陰性對照溶液。
3．2 對照品溶液的制備精密稱取腺苷對照品，加90％甲醇制成0.O15mg/ml的對照品溶液。
3．3 系統(tǒng)適應性試驗取供試品，陰性空白樣品及對照品溶液，照2項色譜條件，各進樣lOμl，測得HPLC圖譜。圖譜表明陰性對照色譜沒有干擾。理論塔板數(shù)按腺苷峰計算不低于3OOO。
3．4 線性關系的考察精密稱取腺苷對照品，加90％甲醇制成0.05mg/ml的溶液，精密吸取上述溶液1、2、4、6、8、lOml于lOml容量瓶中加90％甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進樣1Oμl，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積值為縱坐標，腺苷量（μg）為橫坐標繪制標準曲線，計算的回歸方程為：Y=3806623X+6617r=0.9998。
表明腺苷在0.05～0.5μg范圍內(nèi)具有良好線性關系。
3．5精密度試驗取對照品溶液，進樣10μl，重復進樣6次，峰面積的RSD為1.82％。
3．6穩(wěn)定性試驗取配制好的對照品溶液在0、1、2、4、6、8h分別進樣1Oμl，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為1.94％?？梢姽┰嚻啡芤涸?h內(nèi)穩(wěn)定。
3．7重現(xiàn)性試驗取*（批號為20010710），平行6份樣品，按樣品測定法測定，結(jié)果每粒含腺苷分別為0.042mg,O.04lmg、0.04mg、0.043mg、0.042mg、0.040mg（RSD=2.52％，n=6）表明本法重現(xiàn)性較好。
3．8回收率試驗采用加樣回收法，取已測知含量的*（批號20010710含量為0.041mg／粒）樣品6份，精密稱定，分別精密加入腺苷適量，按樣品溶液制備項下操作，依法制備、進樣、記錄色譜圖、計算回收率。
3．9 樣品測定分別精密吸取對照品與樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，以外標法計算樣品中腺苷的含量。
4 討論
4．1制劑中腺苷的含量測定方法主要有薄層掃描法、分光光度法、液相色譜法、毛細管電泳法等。本文選用HPLC法測定地骨*中腺苷的含量，方法簡便、準確，靈敏度高，可很好的控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。
4．2地骨*為中藥復方制劑，成分復雜，試驗中曾試用15％四氫呋喃的磷酸鹽緩沖溶液；甲醇-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（13：87）、6％乙腈、磷酸鹽緩沖液（pH6.8取0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol／L氫氧化鈉溶液l18ml，用水稀釋至1000ml，即得）-四氫呋喃（99：1）等多種溶劑系統(tǒng)進行分離，確定以磷酸鹽緩沖液（pn6.8取O.2mol／L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol幾氫氧化鈉溶液l18ml，用水稀釋至1000ml，即得）-四氫呋喃（99：1）為流動相，腺苷的分離良好，陰性對照沒有干擾。
4．3樣品溶液的制備，試驗中曾分別用90％甲醇進行了回流、冷浸、超聲波提取三種提取方法的考察．結(jié)果表明三者提取效果基本相同，因超聲波提取法簡便、快速，故選擇超聲波提取法制備樣品溶液。
【參考文獻】
[1] 宋玉良，陳建真，等．血靈口服液中腺苷含量的測定[J]．中國中醫(yī)藥科技，2OO2，9（3）：163
[2] 勞海燕，朱梅，等．心肌保護液中腺苷的含量測定[J]．廣東藥學，1999，9（2）：36
[3] 熊金桂，金水康．蟲草膏中腺苷含量測定方法的探討[J]．中國藥事，2OO0，14（1）：39
[4] 戚雁飛．HPLC測定*中腺甘的含量[J]．中成藥，2O02，24（3）：181
