細胞簡介：

兔角膜內(nèi)皮分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細胞層。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細胞是角膜內(nèi)層的單層細胞，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內(nèi)皮細胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細胞對角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實質(zhì)層相對脫水狀態(tài)，維持透明性。

方法簡介：

公司實驗室分離的兔角膜內(nèi)皮采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的兔角膜內(nèi)皮經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

線粒體呼吸鏈復(fù)合物II試劑盒（琥珀酸-輔酶Q還原酶）

蛋白質(zhì)羰基含量測定試劑盒（測血清、組織）（紫外比色法）

超微量Ca-ATP酶測定試劑盒

超微量Ca2+Mg2+-ATP酶測定試劑盒（比色法）

小鼠肺病毒(PVM)試劑盒

Human hirudin (Hirudin) ELISA Kit 人水蛭素(Hirudin)試劑盒

Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2ELISAKit 人11去輕血栓烷B2(11-DH-TXB2)試劑盒 進口分裝

HumanapoproteinA5,apo-A5試劑盒人載脂蛋白A5(apo-A5)試劑盒

植物葉綠體外膜脂質(zhì)薄層色譜(TLC)分析試劑盒10次

Huma-lymphoopicvirusⅠ,HTLV-ⅠELISAKit人類嗜T淋巴細胞Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)試劑盒

IL21重組小鼠 IL21 / Interleukin 21 蛋白 Protein

成纖維細胞生長因子4(FGF4)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 4 (FGF4)

SIGLEC5重組人 SIGLEC5 蛋白 Protein

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

CD84 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD84 蛋白

成纖維細胞生長因子4(FGF4)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 4 (FGF4)

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

IL21重組小鼠 IL21 / Interleukin 21 蛋白 Protein

CD84 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD84 蛋白

SIGLEC5重組人 SIGLEC5 蛋白 Protein

兔角膜內(nèi)皮細胞大鼠利肽受體2(NPR2)試劑盒 ，英文名： NPR2 ELISA Kit

Mouse free thyroxine (FT4) ELISA Kit 小鼠游離甲狀腺素(FT4)試劑盒

Raudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit 大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforGAD-AbELISAKit大鼠谷脫羧酶自身抗體

細胞過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性比色法定量試劑盒20次

ratprolactin,PRLELISAKit大鼠催乳素(PRL)試劑盒

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。