細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠鼻黏膜成纖維分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在機(jī)體內(nèi)消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡(jiǎn)稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠鼻黏膜成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠鼻黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的好培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠1,4,5-三0酸肌醇(IP3)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： IP3 ELISA Kit

Mouse basic fibroblast growth factor 9 (bFGF-9) ELISA Kit 小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(bFGF-9)檢測(cè)試劑盒

Mouseadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit 小鼠能a1A受體(ADRA1A)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子

通用型總巰基含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitIgM大鼠免疫球蛋白M

FGFR4重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

神經(jīng)介素B(NMB)重組蛋白 Recombinant Neuromedin B (NMB)

CALCA重組人 CALCA / CGRP 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

GPC5 Protein Human 重組人 Glypican 5 / GPC5 蛋白

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

神經(jīng)介素B(NMB)重組蛋白 Recombinant Neuromedin B (NMB)

GPC5 Protein Human 重組人 Glypican 5 / GPC5 蛋白

FGFR4重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CALCA重組人 CALCA / CGRP 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat kidney injury molecule 1 (Kim-1) ELISA Kit 大鼠腎損傷分子1(Kim-1)檢測(cè)試劑盒

HumanCaldesmon,CALDELISAKit 人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinepsilon,C/EBPε檢測(cè)試劑盒人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米Bt-Xa品系試劑盒20次

humanserum/glucocoicoidregulatedkinase2,GSK2ISAKIT人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(GSK2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞兔子β血小板球蛋白檢測(cè)試劑盒   兔子β血小板球蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子β血小板球蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子β血小板球蛋白試劑盒、兔子β血小板球蛋白酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

還原酶檢測(cè)試劑盒   還原酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   還原酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：還原酶試劑盒、還原酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒   過(guò)氧化物酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   過(guò)氧化物酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：過(guò)氧化物酶試劑盒、過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

S-轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒   S-轉(zhuǎn)移酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   S-轉(zhuǎn)移酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：S-轉(zhuǎn)移酶試劑盒、S-轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。