產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Orange Fluorescence)

產(chǎn)品中文名稱：一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒紅色熒光

規(guī)格：50T/100T

貨號(hào)：EY-01X8533
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢:

• 提供優(yōu)化的陽性對(duì)照品，解決凋亡檢測非標(biāo)準(zhǔn)化的問題。

• 優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案，分別適用于熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀。

•  通用的熒光檢測參數(shù)(Ex/Em = 555nm/565 nm)，檢測方便。

保存建議:建議收到貨后保存于-20°C，有效期少為6個(gè)月。一旦開封，請(qǐng)參考說明書中各個(gè)組分的佳保存條件進(jìn)行儲(chǔ)存。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

細(xì)胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。由此，TUNEL成為了檢測DNA片段化（細(xì)胞凋亡）的常用方法。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

5-LOX (5-lipoxygenase 0.5mg5-LOX (5-lipoxygenase) 5-脂氧合酶抗原

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PGLYRP1重組小鼠 PGLYRP1 / PGRP-S 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

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BLOC1S2重組人 BLOC1S2 / BLOS2 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

豬紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA 試劑盒

One pit protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)檢測試劑盒

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit 豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha-GST(HumanAlpha-glathioneS-ansferases)ELISAKit人αS轉(zhuǎn)移酶

血液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Plagrowthhormone,GHELISAKit植物生長激素(GH)檢測試劑盒

豬雌激素(E)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬雌二醇受體(ER)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬雌二醇(E2)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬傳染性胃腸病毒抗體（TGEV）檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

大鼠固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1A(SREBP-1A)檢測試劑盒 ，英文名： SREBP-1A ELISA Kit

Rabbit type III procollagen (P III NP) ELISA Kit 兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒

破傷風(fēng)芽孢梭菌(CT)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-13(HumanMaixmetalloproteinase13)ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶13

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitET-1犬內(nèi)皮素1

一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒紅色熒光PRLR重組小鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP1)重組蛋白 Recombinant Low Density Lipoprotein Receptor Related Protein 1 (LRP1)

ATP5D重組人 ATP5D 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ANP32A Protein Human 重組人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

TNFSF8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白