實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

卵巢不僅是卵子產(chǎn)生、生長并成熟的器官，也是腦垂體前葉分泌的靶器官之一。其中，卵巢間質(zhì)區(qū)是提供卵泡生長和發(fā)育的環(huán)境，卵巢間質(zhì)主要由卵巢間質(zhì)細胞構(gòu)成。探明卵巢間質(zhì)細胞的增值及功能，在發(fā)情周期和妊娠期發(fā)生變化的機理及調(diào)控因素，對進一步研究卵泡發(fā)育的調(diào)控、排卵、黃體形成和退化、卵巢、卵巢間質(zhì)細胞瘤發(fā)病機理，以及在這些生理和病理過程中參與其中的及細胞因子作用機理均有重要意義。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常卵巢組織。

2)細胞鑒定：側(cè)鏈裂解酶（P450SCC）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 間質(zhì) 細 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人游離（fCHOL）elisa檢測試劑盒

犬脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）elisa檢測試劑盒

組織二胺氧化酶（DAO）活性熒光定量檢測試劑盒

小鼠抗Smith抗體(Sm)elisa檢測試劑盒

大鼠膽囊收縮素A受體(CCKAR)elisa檢測試劑盒

活體細胞半胱-6（CASPASE-6）活性原位熒光染色檢測試劑盒

人CXC趨化因子配體16(CXCL16)elisa分析檢測試劑盒

大鼠nNOSelisa檢測試劑盒

小鼠前列腺素E1(PGE1)elisa檢測試劑盒

鋅指蛋白677抗體 ZNF677

鋅指蛋白ZIC5抗體 ZIC5

腸致病性大腸桿菌抗體 E.coli

抗體 Atosiban, Acetate

E3泛素連接酶MUL1抗體 MUL1

ESF1蛋白抗體 ESF1

磷酸化蓬亂蛋白2抗體 phospho-Dishevelled 2 (Thr224)

磷酸化細胞核受體Rev-Erbα抗體 Phospho-NR1D1 (Ser55 + Ser59)

組蛋白去乙酰化酶7抗體 HDAC7

17-β-羥脫氫酶6抗體 HSD17B6

紅細胞分化相關(guān)基因蛋白抗體 Hemogen

環(huán)指蛋白74抗體 RNF74

PE-Cy5標(biāo)記小鼠CD45RB單克隆抗體 mouse CD45RB/PE-Cy5

PE標(biāo)記人CD26單克隆抗體 human CD26/PE

神經(jīng)粘蛋白抗體 Neurocan

絲蛋白酶38抗體 Marapsin2/PRS38

蔗糖含量測試盒

HS3ST3A1蛋白抗體

HS3ST3A1

星形肌動蛋白抗體

兔卵巢間質(zhì)細胞ASTN2

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。