蛋白磷酸酶抑制劑混合液III型熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體
內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體
細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體
外胚層發(fā)育不良抗體
E2 tag標(biāo)簽抗體
鐵螯合酶抗體
DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體
上皮細(xì)胞粘附分子抗體
表皮生長(zhǎng)因子抗體
表皮生長(zhǎng)因子受體3抗體
上皮鈣粘附分子抗體
紅細(xì)胞生成素受體抗體
腦啡肽抗體
EID2蛋白抗體
上皮細(xì)胞粘附分子抗體
紅細(xì)胞膜相關(guān)蛋白ERMAP抗體
腺樣癌特異性相關(guān)抗原抗體EMC1抗體
腺樣癌特異性相關(guān)抗原抗體EMC1抗體
染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1抗體