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中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒甲狀腺冰凍切片操作方法

時(shí)間:2017/1/10閱讀:1326
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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒?甲狀腺冰凍切片操作方法

1. 主要試劑與儀器

0.5%氨水返藍(lán)液抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒?、Gill改良蘇木精染液、0.5%~1%鹽酸乙醇分化液、1%醇溶性伊紅染液、甲醇醋酸混合固定液(甲醇50ml、冰醋酸2.5ml)、各梯度乙醇溶液、二甲苯及中性樹膠均

2.操作方法

冷凍機(jī)溫度為-15℃~-18℃。將新鮮活體組織塊切成1.5cm×1.5cm×0.3cm大小,速凍,切片厚度為5μm。粗修組織塊,然后細(xì)修切面,再用戴手套手的大拇指或大魚際肌在切面上溫暖2~3s,動(dòng)作稍慢而勻速。抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒?切片制成后立即放入甲醇醋酸混合固定液固定0.5~1min后水洗,Gill改良蘇木精染胞核1~3min后水洗,0.5%~1%鹽酸乙醇分化液分化1~2次后水洗,0.5%氨水返藍(lán)2s后水洗,1%醇溶性伊紅染胞質(zhì)10s,逐級(jí)梯度乙醇快速脫水,中性樹膠封固[1-2]。

3.結(jié)果

3.1 取材浸水對(duì)組織HE染色效果的影響

組織浸水后鏡下出現(xiàn)冰晶及類似氣泡樣的“黑水珠”,按壓不會(huì)消失;未浸水組織結(jié)構(gòu)完整,未見(jiàn)上述現(xiàn)象。

3.2 冷凍溫度對(duì)組織

冷凍溫度過(guò)低時(shí),鏡下出現(xiàn)甲狀腺膠質(zhì)染色不均勻,甚至出現(xiàn)多量大小不一的空泡;溫度適宜時(shí),組織結(jié)構(gòu)清晰完整、細(xì)胞無(wú)明顯膨脹、極少有冰晶形成。

3.3 復(fù)溫對(duì)組織

HE染色效果未復(fù)溫時(shí),鏡下顯示濾泡與濾泡之間出現(xiàn)收縮裂隙;復(fù)溫后無(wú)收縮裂隙情況出現(xiàn)。

3.4 固定液對(duì)組織

固定液中未加冰醋酸時(shí),鏡下顯示膠質(zhì)收縮,皺褶形成,膠質(zhì)與濾泡上皮脫落,出現(xiàn)空暈;加冰醋酸后,組織結(jié)構(gòu)清晰,核著色清楚,核漿對(duì)比度好,組織無(wú)皺縮現(xiàn)象發(fā)生。

3.5 染色對(duì)組織

抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒?染色不充分時(shí),鏡下顯示組織色澤偏紅,核對(duì)比度不強(qiáng),影響診斷;染色充分后,鏡下組織結(jié)構(gòu)清晰完整,核漿紅藍(lán)對(duì)比鮮明。

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