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小鼠腦腸肽elisa檢測試劑盒樣本實驗前準備

時間:2022/5/24閱讀:772
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小鼠腦腸肽elisa檢測試劑盒樣本實驗前準備:

ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

(1)血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

(2)血漿:

應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

(3)尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

(4)細胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。

(5)培養(yǎng)細胞

檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

(6)組織標本

切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

結果計算與判斷


1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。


2. 以標準品500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0 ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。


3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應AMA含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。


試劑盒性能


  1.   靈敏度:最小的AMA 檢測濃度小于4ng/ml。


2. 特異性:可同時檢測重組或天然的小鼠AMA。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。


3. 重復性:板內、板見變異系數(shù)均小于11%。


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