當(dāng)我們需要運輸或者長期不用某種細胞時，通常會使用凍存的方法來保存。若未做好細胞凍存，還會直接影響后續(xù)細胞復(fù)蘇狀態(tài)，所以細胞凍存的重要性不容小覷。
本期信裕細胞學(xué)堂將帶來貼壁細胞和懸浮細胞的凍存操作步驟及注意事項，以便大家查漏補缺。
在進行凍存操作前，可預(yù)先配置好凍存液；若使用無血清非程序凍存液，則無需自己配制，也無需使用程序降溫盒。
01貼壁細胞凍存操作
◆ 將待操作的細胞去上清，用PBS潤洗；
◆ 去上清，加入Pancreatic enzymes消化，消化完成后加入completely培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻制備成細胞懸液；
◆ 1200rpm(250g)3min離心后盡量吸干凈上清，收集細胞沉淀；
◆ 加入配置好的凍存液重懸，一個T25培養(yǎng)瓶長到80%左右密度的細胞量可凍存1支，或者細胞計數(shù)后，按照3~5×106cells/支凍存，凍存液用量推薦0.5~1mL/支；
◆ 分裝完畢后，擰緊凍存管蓋并做好標(biāo)記；
◆ 將分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒，放入-80℃冰箱過夜；
◆ 最后將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
02懸浮細胞凍存操作
?直接將細胞懸液于1200rpm(約250g)3分鐘離心后盡量吸干凈上清，收集細胞沉淀；
? 去上清，用配置好的凍存液重懸細胞，一個T25培養(yǎng)瓶長到傳代密度時的細胞量可凍存1支，或者細胞計數(shù)后，按照3~5×106cells/支凍存，凍存液用量推薦0.5~1mL/支；
? 分裝完畢后，擰緊凍存管蓋并做好標(biāo)記；
? 將分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒，放入-80℃冰箱過夜；
? 再轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
注意事項
01細胞凍存液需提前配制，不可直接將DMSO加入細胞懸液中；
02應(yīng)選擇匯合度80%-90%左右，處于對數(shù)生長期時的細胞進行凍存操作，確保細胞凍存時狀態(tài)最佳，凍存密度可根據(jù)細胞特性進行調(diào)整；
03程序凍存盒、細胞凍存液、completely培養(yǎng)基等試劑都要復(fù)溫至室溫備用；
04凍存前注意切勿消化時間過長、吹打力度過重、離心轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長，以免造成細胞損傷；
05凍存細胞長期保存應(yīng)放置于液氮，不建議在-80℃長期保存；
