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ATP生物發(fā)光檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：

儲(chǔ)存：未打開包裝前避光儲(chǔ)存于-20℃，打開包裝后根據(jù)產(chǎn)品說明書上的單個(gè)組分的儲(chǔ)存條件保存。避免反復(fù)凍融以及ATP污染。

• 產(chǎn)品介紹：

利用螢火蟲熒光素酶催化底物熒光素的轉(zhuǎn)化，利用ATP的能量發(fā)射出光子。發(fā)光信號(hào)與存在的ATP量呈正比的原理進(jìn)行ATP的生物發(fā)光檢測(cè)。該產(chǎn)品可用于快速、定量測(cè)定液體樣品中或細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。產(chǎn)品中的Lysis Buffer能夠有效裂解細(xì)菌、細(xì)胞以及微生物樣品，充分釋放ATP，適用于多種樣本來源的ATP檢測(cè)。Luciferase/Luciferin substrate采用優(yōu)化的酶反應(yīng)體系，產(chǎn)生的熒光在一分鐘內(nèi)保持穩(wěn)定。該產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度達(dá)到10^-16 mol，檢測(cè)范圍在10^-11至10^-16 mol之間，可用于微量ATP檢測(cè)。

ATP生物發(fā)光檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，ATP生物發(fā)光檢測(cè)試劑盒說明書

• 適用范圍：

可用于檢測(cè)多種來源樣品中細(xì)菌、細(xì)胞以及微生物的ATP，及微量ATP檢測(cè)。

• 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.  方便：反應(yīng)試劑容易配制。

2.  檢測(cè)試劑產(chǎn)生的熒光穩(wěn)定性高，不需要快速混勻操作。

3.  快速：樣品裂解在5-10分鐘內(nèi)完成，加入稀釋后的Luciferase/Luciferin substratet即可檢測(cè)。

4.  靈敏：可檢測(cè)少至10^-16 mol ATP。

• 操作步驟：
  1. 試劑準(zhǔn)備：

（1）稀釋Lysis Buffer：將Lysis Buffer室溫溶化，用無菌水5倍稀釋使用。（為避免ATP污染，請(qǐng)使用無菌水稀釋）。置于4℃保存。

（2）配制Luciferase/Luciferin Reagent：L/L Dilution Buffer室溫溶化后，作為稀釋液將Luciferase/Luciferin substrate進(jìn)行50倍稀釋，配制成Luciferase/Luciferin Reagent，分裝后-20℃保存。測(cè)定前取出平衡至室溫使用，凍融次數(shù)不超過3次。

（3）ATP標(biāo)準(zhǔn)品的配制：用Lysis Buffer將ATP母液稀釋至10^-12至10^-17mol/ul的濃度，分別取10ul進(jìn)行檢測(cè)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，即在10^-11至10^-16mol ATP范圍內(nèi)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，呈很好的線性關(guān)系。配制方法參考下表：

2. 樣品裂解：    

貼壁細(xì)胞的裂解：
吸除培養(yǎng)液，加入足夠覆蓋細(xì)胞的Lysis Buffer（如24孔細(xì)胞培養(yǎng)板加入150ul Lysis Buffer），可以使用移液器進(jìn)行反復(fù)吹打或晃動(dòng)培養(yǎng)板使Lysis Buffer充分接觸并裂解細(xì)胞，室溫靜置5-10min后，吸取上清進(jìn)行檢測(cè)。

懸浮細(xì)菌、細(xì)胞的裂解：
轉(zhuǎn)移懸浮液到1.5ml離心管中，離心沉淀細(xì)胞，棄盡上清，按照24孔板每孔的細(xì)胞量對(duì)應(yīng)150μl Lysis Buffer的比例加入Lysis Buffer，移液器反復(fù)吹打幾次，室溫靜置5-10分鐘后，吸取上清進(jìn)行檢測(cè)。

對(duì)于懸浮樣品的裂解也可以將樣品充分混勻后直接吸取適量體積加入Lysis Buffer，移液器反復(fù)吹打幾次，室溫靜置5-10分鐘后進(jìn)行檢測(cè)。樣品體積不超過Lysis Buffer的1/3。

對(duì)植物、動(dòng)物組織樣品的裂解：
取適量組織樣品，加入適當(dāng)比例的Lysis Buffer（如20mg植物組織加入500ul Lysis Buffer）后用玻璃勻漿器或研缽進(jìn)行勻漿。充分勻漿可以確保組織被*裂解，離心后取上清進(jìn)行檢測(cè)。

其它來源的ATP：

對(duì)于其它有效方法如三氯乙酸法等提取的ATP樣品，或游離ATP的檢測(cè)，可直接稀釋到檢測(cè)范圍后用配制好的Luciferase/Luciferin Reagent進(jìn)行檢測(cè)。
3. 樣品測(cè)定：
（1）ATP標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定：吸取50ul配制好的Luciferase/Luciferin Reagent加入測(cè)定管中，放置2分鐘以減少背景發(fā)光值，加入10ul 配制好的ATP標(biāo)準(zhǔn)品，移液器輕輕吹打幾次，立即進(jìn)行檢測(cè)。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照，即不添加ATP，直接將10ul Lysis Buffer加入50ul Luciferase/Luciferin Reagent中進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定試劑的背景發(fā)光值。如果背景發(fā)光值過高，可以將配制好的Luciferase/Luciferin Reagent放入測(cè)定管后室溫放置15分鐘以消耗ATP，降低背景發(fā)光值。

（2）樣品的測(cè)定：吸取50ul Luciferase/Luciferin Reagent加入測(cè)定管中，加入10ul 樣品裂解混合液，移液器輕輕吹打幾次，立即進(jìn)行檢測(cè)。
（3）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中ATP的濃度。

• 注意事項(xiàng)：
• 操作過程中需注意避免ATP污染，尤其是檢測(cè)微量ATP時(shí)，配制試劑時(shí)需用無菌水，使用的吸頭需滅菌，操作時(shí)戴一次性手套。
• Luciferase活性可被多種去污劑抑制，其佳pH為7-8之間，本試劑盒提供的裂解液用量不超過10ul時(shí)對(duì)Luciferase/Luciferin Reagent發(fā)光值沒有影響，但是如果需要采用其它裂解方法提取ATP時(shí)，需考慮裂解液成分對(duì)luciferase活性的影響。
• 配制好的Luciferase/Luciferin Reagent在室溫放置6小時(shí)，4℃放置7天內(nèi)發(fā)光值下降在10%之內(nèi)，因此檢測(cè)微量ATP時(shí)，為了降低背景發(fā)光值，可將Luciferase/Luciferin Reagent室溫放置6小時(shí)內(nèi)或4℃放置7天內(nèi)以充分消耗ATP。

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