HEPES (4-(2-羥乙基)-1-派嗪乙磺酸) 是一種兩性離子有機化學緩沖劑，對細胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/LHEPES即可達到緩沖能力。

  好的緩沖液”如HEPES具有以下特征： 
 

• pKa 值介于 6.0 和 8.0 之間
• 高溶解度
• 膜不透性
• 對生化反應(yīng)影響有限
• 極低的可見光和紫外光吸收
• 耐化學作用和酶解作用
• 易于制備。

  HEPES廣泛應(yīng)用于多種生物化學反應(yīng)，并在某些細胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑.

   碳酸氫鹽是常用的培養(yǎng)基緩沖系統(tǒng)。 這是由于碳酸氫鹽對細胞具有營養(yǎng)作用的優(yōu)勢，盡管在生理 pH 下，其緩沖能力會有所降低。 加入HEPES，在pH 7.2至7.6下為細胞培養(yǎng)基提供了其它緩沖系統(tǒng)。 

   細胞培養(yǎng)基中的HEPES濃度范圍為10 mM至25 mM。  

   HEPES 不為細胞供給營養(yǎng)。 只有在細胞培養(yǎng)過程中需要長時間在 CO ₂ 培養(yǎng)箱外處理細胞時，才將其加入培養(yǎng)基，增強緩沖能力。

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