在制造治療性的蛋白、疫苗及其他生物制品時(shí)，制藥公司必須從細(xì)菌或哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中純化出活性的分子。然而，由于這個(gè)過程的效率不高，宿主細(xì)胞的雜質(zhì)（包括DNA）經(jīng)常會(huì)污染產(chǎn)品。因此，制造商必須確保宿主細(xì)胞殘留DNA（HCD）的水平低于WHO的標(biāo)準(zhǔn)，通常是100 pg/劑量以下。

這就需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制。通常，分析人員采用實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）來測(cè)定殘留DNA的水平，這需要純化出宿主細(xì)胞殘留DNA，以去除樣品中的PCR抑制劑。這一步不僅增加時(shí)間和成本，也會(huì)造成DNA的損失，導(dǎo)致污染水平被低估。

為此，Bio-Rad公司推出了新產(chǎn)品 – ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification。這種預(yù)混液可配合Bio-Rad的微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)使用，直接測(cè)定生物制品中的宿主細(xì)胞殘留DNA。

與實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)相比，使用微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）技術(shù)和預(yù)混液的好處在于可跳過DNA純化的步驟，直接測(cè)定宿主細(xì)胞殘留DNA。Why？因?yàn)槲⒌问綌?shù)字PCR技術(shù)采用反應(yīng)分液和終點(diǎn)分析，不容易受到PCR抑制的影響。

同時(shí)，ddPCR技術(shù)對(duì)靶分子的數(shù)量進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，而不需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此大大簡(jiǎn)化了殘留DNA的定量。據(jù)Bio-Rad介紹，每一批的ddPCR Supermix都是在嚴(yán)格的質(zhì)量控制下生物試劑的，確保不含可檢測(cè)的大腸桿菌、小鼠、人、酵母和CHO細(xì)胞DNA。

ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification是以2x濃度提供的，包含探針法ddPCR所需的各種組分，不含引物、探針和模板。它采用熱啟動(dòng)聚合酶，確保酶在分液的過程中失活。

Bio-Rad的QX200微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在兩年前推出。與傳統(tǒng)的定量PCR相比，數(shù)字PCR的度和靈敏度更佳。利用微滴式數(shù)字PCR技術(shù)，研究人員可以檢測(cè)稀有突變，測(cè)定拷貝數(shù)變異，并對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行定量。

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