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南京信帆生物:雙向免疫擴(kuò)散法

時間:2016/4/13閱讀:1064
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雙向免疫擴(kuò)散法是利用瓊脂凝膠為介質(zhì)的一種沉淀反應(yīng)。即可溶性抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴(kuò)散,彼此相遇,在比例適當(dāng)處形成沉淀線。根據(jù)沉淀線的有無、形狀和位置對抗原或抗體進(jìn)行定性分析,也可用于抗體的半定量檢測。

將可溶性抗原(如小牛血清)與相應(yīng)抗體(如兔抗小牛血清的抗體)混合,當(dāng)兩者比例合適并有電解質(zhì)(如氯化鈉、鹽等)存在時,即有抗原―抗體復(fù)合物的沉淀出現(xiàn),此為沉淀反應(yīng)(precipitin reaction)。如以瓊脂凝膠為支持介質(zhì),則在凝膠中出現(xiàn)可見的沉淀線、沉淀弧或沉淀峰。根據(jù)沉淀出現(xiàn)與否及沉淀量的多寡,可定性、定量地檢測出樣品中抗原或抗體的存在及含量。免疫學(xué)的一些測定方法即基于此特性。

雙向擴(kuò)散法(double diffusion),zui早由Ouchterlony創(chuàng)立,故又稱Ouchterlony法。瓊脂凝膠是多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),大分子物質(zhì)可以自由通過,這種分子的擴(kuò)散作用使分別兩處的抗原和相應(yīng)抗體相遇,形成抗原―抗體復(fù)合物,比例合適時出現(xiàn)沉淀。由于凝膠透明度高,可直接觀察到復(fù)合物的沉淀線(弧)。沉淀線(弧)的特征與位置取決于抗原相對分子質(zhì)量的大小、分子結(jié)構(gòu)、擴(kuò)散系數(shù)和濃度等因素。當(dāng)抗原、抗體存在多種系統(tǒng)時,會出現(xiàn)多條沉淀線(弧)。依據(jù)沉淀線(弧)可以定性抗原。

此法操作簡便、靈敏度高,是zui為常用的免疫學(xué)測定抗原和測定抗血清效價的方法

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