寡核苷酸與抗體的結(jié)合
連接用的抗體可以是特異性一抗，也可以是第二抗體或其他的連接二抗，如抗（Dig）、抗熒光素（FITC）或抗*（biotin）二抗。

1．抗體的脫鹽和活化
首先對(duì)抗體免疫球蛋白進(jìn)行脫鹽，然后進(jìn)行抗體活化。在41 nmol抗體分子中加入410mmol的GMBS[硫代—N—（4—馬來酰亞胺丁酰）硫代丁二酰亞胺，sulfo-N-（4—maleim—idobutyryloxy）sulfosuccinimide]，暗處，37℃，在氮?dú)庵?0 rain，移人室溫中繼續(xù)反應(yīng)30min，用PD-10色譜柱（用pH7．5 PBS平衡柱子）除去多余的磺化—GMBS，將活化抗體4℃濃縮。此時(shí)每一個(gè)抗體分子中含有多個(gè)馬來酰亞胺，可以用Ellman’s試劑滴定活化抗體的量，主要測(cè)定抗體分子上的巰基?？贵w活化后與寡核苷酸連接。

2．活化抗體與寡核苷酸結(jié)合
將28．1nmol磺化GMBS活化抗體和142 nmol5硫醇寡核苷酸混合，總體積為825ul，室溫中反應(yīng)2h，隨后移人4℃中反應(yīng)過夜。

3．純化結(jié)合物
純化結(jié)合物一般先用陰離子交換色譜柱Q—sepharose（先用梯度鹽洗柱，然后加樣，洗脫，收集結(jié)合物），再用SephadexG-200色譜柱除去游離的寡核苷酸。純化后結(jié)合物中寡核苷酸和抗體之比為10：1，多數(shù)情況下，1個(gè)抗體分子可結(jié)合3～5個(gè)寡核苷酸。