層析法是一種物理分離方法。柱層析法是層析方法中的一個類型，分為吸附柱層析法和分配柱層析法。ELISA試劑盒

    吸附柱層析法是分離、純化和鑒定有機物的重要方法。它是根據(jù)混合物中各組分的分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)（極性）來選擇合適的吸附劑和洗脫劑，從而利用吸附劑對各組分吸附能力的不同及各組分在洗脫劑中的溶解性能不同達到分離目的。吸附柱層析法通常是在玻璃層析柱中裝入表面積很大、經(jīng)過活化的多孔性或粉狀固體吸附劑（常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠等）。當(dāng)混合物溶液流過吸附柱時，各組分同時被吸附在柱的上端，然后從柱頂不斷加入溶劑（洗脫劑）洗脫。由于不同化合物吸附能力不同，從而隨著溶劑下移的速度不同，于是混合物中各組分按吸附劑對它們所吸附的強弱順序在柱中自上而下形成了若干色帶。                     

    在洗脫過程中，柱中連續(xù)不斷地發(fā)生吸附和溶解的交替現(xiàn)象。被吸附的組分被溶解吸出來，隨著溶劑向下移動，又遇到新的吸附劑顆粒，把組分從溶液中吸附出來，而繼續(xù)流下的新溶劑又使組分溶解而向下移動，這樣經(jīng)過適當(dāng)時間移動后，各種組分就可以*分開，繼續(xù)用溶劑洗脫，吸附能力zui弱的組分隨溶劑首先流出，再繼續(xù)加溶劑直至各組分依次全部由柱中洗出為止，分別收集各組分。

    綠色植物如菠菜葉中的葉綠體含有綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類天然色素。這兩類色素都不溶于水，而溶于有機溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機溶劑提取。ELISA試劑盒

    葉綠素存在兩種結(jié)構(gòu)相似的形式即葉綠素a(C55H72O5N4Mg)和葉綠素b(C55H70O6N4Mg)，其差別僅是葉綠素a中一個甲基被甲酰基所取代從而形成了葉綠素b。它們都是吡咯衍生物與金屬鎂的絡(luò)合物，是植物進行光合作用所必需的催化劑。植物中葉綠素a 的含量通常是b 的3 倍。盡管葉綠素分子中含有一些極性基團，但大的烴基結(jié)構(gòu)使它易溶于醚、石油醚等一些非極性的溶劑。

    胡蘿卜素（C40H56）是具有長鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯。它有三種異構(gòu)體，即a-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和γ-胡蘿卜素，其中β-胡蘿卜素含量zui多，也zui重要。在生物體內(nèi)，β-胡蘿卜素受酶催化氧化形成*。目前β-胡蘿卜素已可進行工業(yè)生產(chǎn)，可作為* 使用，也可作為食品工業(yè)中的色素。

    葉黃素（C40H56O2）是胡蘿卜素的羥基衍生物，它在綠葉中的含量通常是胡蘿卜素的兩倍。與胡蘿卜素相比，葉黃素較易溶于醇而在石油醚中溶解度較小。

    石油醚是一種脂溶性很強的有機溶劑。葉綠體中的四種色素在石油醚中的溶解度是不同的：溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快；溶解度低的隨層析液在濾紙上擴散得慢。溶解度zui高的是胡蘿卜素，它隨石油醚在濾紙上擴散得zui快，葉黃素和葉綠素a的溶解度次之；葉綠素b的溶解度zui低，擴散得zui慢。這樣，四種色素就在擴散過程中分離開來。

    同樣，提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對不同物質(zhì)的吸附力不同，當(dāng)用適當(dāng)?shù)娜軇┩苿訒r，混合物中各成分在兩相（流動相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，所以它們的移動速度不同，經(jīng)過一定時間層析后，便將混合色素分離。ELISA試劑盒

    本實驗是用活性氧化鋁作吸附劑，分離菠菜中胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a和葉綠素b。