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上海一研生物科技有限公司

細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察方法

時(shí)間:2015-12-2閱讀:343
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一、形態(tài)學(xué)觀察方法

1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細(xì)胞呈圓形,胞核深染,胞質(zhì)濃縮,染色質(zhì)成團(tuán)塊狀,細(xì)胞表面有“出芽"現(xiàn)象。

2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細(xì)胞核呈黃綠色熒光,胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè),可見細(xì)胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。

3、臺(tái)盼藍(lán)染色:如果細(xì)胞膜不完整、破裂,臺(tái)盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞變藍(lán),即為壞死。如果細(xì)胞膜完整,細(xì)胞不為臺(tái)盼藍(lán)染色,則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。此方法對(duì)反映細(xì)胞膜的完整性,區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助。

4、透射電鏡觀察:可見凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失,核染色質(zhì)固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質(zhì)緊實(shí),細(xì)胞器集中,胞膜起泡或出“芽"及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。

二、DNA凝膠電泳

(一)、檢測(cè)原理

    細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死,其細(xì)胞DNA均發(fā)生斷裂,細(xì)胞內(nèi)小分子量DNA片斷增加,高分子DNA減少,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)DNA片斷。但凋亡細(xì)胞DNA斷裂點(diǎn)均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間,出現(xiàn)180-200bpDNA片斷,而壞死細(xì)胞的DNA斷裂點(diǎn)為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細(xì)胞的死亡,并可與壞死細(xì)胞區(qū)別。

(二)結(jié)果判斷

    正常活細(xì)胞DNA 電泳出現(xiàn)階梯狀(LADDER)條帶;壞死細(xì)胞DNA電泳類似血抹片時(shí)的連續(xù)性條帶。

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