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目前常用的固定系統(tǒng)有:
4%聚甲醛,1.5%-2%戊二醛,1%多聚甲醛+1%戊二醛,4%多聚甲醛+0.5%苦味酸+0.25%戊二醛,96%乙醇+1%醋酸。不論采用哪些系統(tǒng),使用前必須用已知效價(jià)的抗原做一系列預(yù)實(shí)驗(yàn)。如固定劑的種類(lèi)濃度、溫度、pH及固定時(shí)間等。然后做出預(yù)處理的效價(jià),作為失活參考以再選擇zui適條件。
非特異性吸附
非特異性吸附與酶標(biāo)抗體、抗血清的稀釋度、染色時(shí)間,溫度及介質(zhì)等有關(guān),其中zui主要的是抗血清及標(biāo)記抗體的稀釋。一般認(rèn)為價(jià)抗血清或標(biāo)記抗體稀釋到低蛋白濃度,用于標(biāo)記染色可獲得的結(jié)果。因?yàn)榈偷鞍诐舛扔欣诮档头翘禺愋晕?。?shí)際應(yīng)用的蛋白濃度大致在0.50mg/ml-2mg/ml。工作效價(jià)一般在1︰20-1︰400,在實(shí)際工作中,將標(biāo)記抗體或抗血清稀釋到1︰100倍以上則可獲得理想的陽(yáng)性結(jié)果,而非特異性吸附必然降得很低。
工作濃度的選擇是將標(biāo)記抗體或抗血清作1︰2、1︰4、1︰8……1︰256的稀釋?zhuān)鲆阎?yáng)性標(biāo)本的標(biāo)記染色觀(guān)察,取其陽(yáng)性沉積物明顯,而非特異性吸附zui低的一稀釋度做為工作濃度。
標(biāo)記染色法
標(biāo)記染色法分為直接染色法與間接染色法兩種。前者的特點(diǎn)是特異性較高,敏感性低,標(biāo)記抗體只能用于檢測(cè)一種抗原。后者敏感性較強(qiáng),一種標(biāo)記抗體可用于多種抗原的檢測(cè)。缺點(diǎn)是特異性較差。
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