操作步驟

一 免疫組化（SP法）操作步驟
1． 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復，可在此步后進行

2.緩沖液洗 3min/2 次。

3. 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。

4. 緩沖液洗 5min/2 次。

5. 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
（注：孵育不要超過 10 分鐘，否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 － 10% 正常羊血清，這一步可以省略。）

6. 緩沖液洗 5min/2 次。抗原

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 － 2 小時。（具體孵育時間和溫度由試驗者zui終決定）

8. 緩沖液洗 5min/2 次。

9 ． 滴加 Primary Antibody Enhancer（增強子），在室溫下孵育 20 分鐘。

10 ．緩沖液洗 5min/2 次。

11 ．滴加 HRP Polymer（酶標二抗） ，在室溫下孵育 30 分鐘。
（注：HRP Polymer 對光敏感，應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。）

12 ．緩沖液洗 5min/2 次。

13 ．向 1ml DAB Plus Substrate （或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen），混勻后滴加到切片上，孵育 3 － 15 分鐘。（具體時間由染色深淺決定。）抗原

14 ．自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。