在什么情況下使用 Triton-X100？
 
1.Triton X-100 化學(xué)名稱為聚乙二醇辛基苯基醚，是一種去污劑。在免疫組織化學(xué)(10 μm 以上厚切片) 和免疫細胞化學(xué)中一般用 Triton X-100 作為細胞通透劑，在膜上打孔。
 
2.其作用原理：Triton X-100 可以溶解細胞膜、細胞核膜、細胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進入胞漿和胞核內(nèi)，故在細胞免疫組化時尤為推薦使用，這樣抗體就能順利進入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。
 
3.Triton X-100 既是一種表面活性劑，也有抗氧化作用。
 
封閉血清的選擇原則是什么？
 
1.膜上或切片上有剩余的位點可以非特異性吸附抗體，造成后續(xù)結(jié)果的假陽性。
 
2.封閉血清一般是和二抗同一來源的，血清中動物自身的抗體，預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點發(fā)生結(jié)合，否則在后面的步驟中如果和二抗發(fā)生結(jié)合，會造成背景。
 
3.也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能與一抗來源一致。