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當(dāng)前位置:上海一研生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>常規(guī)切片的浸蠟、包埋和磨刀技術(shù)
浸蠟
組織透明后,在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱為浸蠟。用其他浸透劑(如火棉膠、明膠等)滲入組織內(nèi)部的過程可稱為浸透或透入。浸蠟溫度過高(超過60℃),在蠟內(nèi)加入二甲苯蠟或由于透明時(shí)帶進(jìn)的二甲苯過多,都會(huì)導(dǎo)致組織發(fā)硬,還會(huì)使組織內(nèi)的抗原受到破壞;所以作者主張浸蠟用的石蠟熔點(diǎn)在56℃(三道),*道:石蠟30分鐘;第二道:石蠟90分鐘;第三道:石蠟,90分鐘。浸蠟溫度控制在56~58℃左右。(*道也可用硬脂酸石蠟1:3混合浸蠟,不僅可軟化組織,特別適用于比較韌、硬的組織,而且由于硬脂酸是弱酸性的,對(duì)細(xì)胞核有媒染作用,核漿比鮮明,但容易脫片;同時(shí)對(duì)疏松組織容易散片)。有條件的可以每天打開*道石蠟的蓋子,讓二甲苯揮發(fā)。浸蠟所用的石蠟如有雜質(zhì)盡可能過濾,以防附在組織上,造成切片刀刀口受損,或切片破碎和劃痕增多。細(xì)胞
包埋
用包埋劑來支持組織的過程稱包埋。zui常用的是石蠟包埋法。包埋的關(guān)鍵一是平整,二是方位。要求在包埋時(shí),應(yīng)采用鑷子輕壓組織塊拱起部份,使之平貼于底部,通常采用組織的zui大面包埋。囊壁、管腔組織應(yīng)豎直包埋。小塊多顆組織,應(yīng)盡量放在一起,并保證在一個(gè)平面上。修去兩邊的余蠟(所謂的兩邊,指切片時(shí)與切片刀垂直的兩側(cè))。包埋時(shí)還應(yīng)注意有無縫線,紙絮,如有一定要去除。胃黏膜活檢標(biāo)本,不能按一般的規(guī)律取zui大包埋面,應(yīng)采取窄面豎起包埋。包埋的蠟更應(yīng)過濾,留有雜質(zhì)的石蠟,容易造成污染或刀口受損。蠟的熔點(diǎn)應(yīng)在56~58℃之間選擇,不提倡在冬天使用軟蠟。因?yàn)橛密浵灠竦南瀴K,到了夏天,會(huì)粘在一起,不利于資料的保存,而且即使在冬天,用硬蠟包埋的蠟塊也比用軟蠟包埋的蠟塊要好切。
磨刀
要想切好一張切片,首先要有一把鋒利的切片刀。磨刀是從事切片技術(shù)人員的一項(xiàng)zui基本技術(shù),刀磨的好壞,直接關(guān)系到切片的質(zhì)量。磨刀的手法各人不同,但都要求用力均勻,使刀口和磨刀石全面接觸,兩手的用力點(diǎn)應(yīng)在刀口上,而不是在刀背上。切片刀應(yīng)用一次磨一次,每次僅需10~15分鐘,過長時(shí)間的磨刀,容易把已經(jīng)磨出的鋒刃磨掉,檢查切片刀是否鋒利,用手試摸刀口的方法并不十分科學(xué),不僅不能證明切片刀是否真正鋒利,細(xì)胞而且容損害刀口,zui簡單的辦法是每次磨好后拿一個(gè)蠟塊試切一下。每次磨好刀后,應(yīng)將磨刀石用蓋子蓋好,以防灰塵掉在磨刀石上,用有灰的磨刀石磨刀,會(huì)使切片刀產(chǎn)生許多細(xì)小的缺口?,F(xiàn)在很多單位都買了磨刀機(jī),磨刀機(jī)用來開刀鋒和磨缺口的確不錯(cuò),但由于磨刀的角度和時(shí)間不易掌握,故效果并不理想。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),真正的鋒刃很難用機(jī)器磨出來。一次性刀片在很大程度上解決了這個(gè)問題。如用一次性刀片,必須及時(shí)更換刀口。一個(gè)刀口切小標(biāo)本不應(yīng)超過20~25只蠟塊,切大標(biāo)本不應(yīng)超過10~15只蠟塊。
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