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豐壽(上海)生物科技有限公司

酶聯(lián)免疫試劑盒的研制

時(shí)間:2015-7-2閱讀:247
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    本研究以2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為基礎(chǔ)合成了克百威的兩種半抗原,6—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 酶聯(lián)免疫試劑盒用合成的克百威免疫原免疫兔子后獲得價(jià)、高特異性的抗克百威多克隆抗血清,用間接ELISA測(cè)定效價(jià)為1:16000~1:128000,純化抗體效價(jià)為1:500000~1:4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標(biāo)抗體,同時(shí)了測(cè)定了酶標(biāo)抗體的活性,效價(jià)為1:4000。

    所得克百威多抗血清與丁硫克百威的交叉反應(yīng)率6.19%,與呋喃酚的交叉反應(yīng)率為4.00%,與供試的其它5種氨基甲酸酯類的交叉反應(yīng)率均小于0.44%,對(duì)于三種有機(jī)磷的交叉反應(yīng)率均低于0.12%。 同時(shí),根據(jù)抗體抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)的原理,進(jìn)一步研究了抗克百威抗體對(duì)小鼠克百威中毒后的解毒作用,試驗(yàn)結(jié)果表明,酶聯(lián)免疫試劑盒抗體可以較好地緩解克百威對(duì)乙酰*酯酶按捺作用的癥狀,使中毒小鼠逐漸恢復(fù)正常。同時(shí)將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成克百威免疫原和包被抗原,并用紫外光譜法測(cè)定克百威與載體蛋白結(jié)合物結(jié)合比。

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