牛多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）表達。
實驗原理
牛多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）Elisa試劑盒說明書本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中牛多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）表達。用純化的抗
原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）相結合，經洗滌
除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合
物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作
用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相
比較，從而判定標本中牛多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 陽性對照0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 陰性對照0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）陰性
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）陽性
。
牛多殺性巴氏桿菌抗體（PMAb）Elisa試劑盒說明書注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸，使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月
