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技術(shù)文章

吉姆薩染色實(shí)驗(yàn)

閱讀：297發(fā)布時(shí)間：2015-6-10

實(shí)驗(yàn)材料    原位雜交玻片
試劑、試劑盒    吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯
儀器、耗材    染色盤(pán)培養(yǎng)箱濾紙
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤(pán)中。

（1）1個(gè)盤(pán)：pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。

（2）3個(gè)盤(pán)：水。

（3）脫水系列溶液：

①3個(gè)盤(pán)：分別盛50%、70%和95%乙醇。

②2個(gè)盤(pán)：盛有100%乙醇。

③3個(gè)盤(pán)：盛有二甲苯。
 
3.  在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s（依染色時(shí)間決定染色的強(qiáng)弱），將玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

4.  連續(xù)用乙醇脫水系列溶液處理，每盤(pán)中浸泡2 min，將玻片移至二甲苯盤(pán)中，毎次浸泡2 min，共3次。
 
5.  在通風(fēng)櫥中，按如下操作壓片固定：用一平頭鑷（拿在左手），從二甲苯中取出一塊玻片，夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端（切片所處位置），左手拿一干凈的蓋玻片，很緩慢地放在載玻片上（在加壓片固定介質(zhì)和蓋玻片前，勿使玻片變干，因微小氣泡會(huì)造成人為假象）。
 
6.  用3MM 濾紙，沿蓋玻片邊緣，小心吸去多余固片介質(zhì)/二甲苯，并擦拭載玻片背面（勿擦拭蓋玻片）。
 
7.  將玻片平放于一硬紙盒盤(pán)上，置42℃溫孵箱2天使之凝固。
 
8.  以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳，染料及固片介質(zhì)。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒，必要時(shí)，載玻片上再注明標(biāo)簽。

9.  顯微鏡觀察玻片，觀察時(shí)可依信號(hào)強(qiáng)弱，調(diào)節(jié)光亮。
收起 
注意事項(xiàng)    
1.  勿將玻片直立存放于玻片中，因此時(shí)固片介質(zhì)尚未凝結(jié)。


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