小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒說明書

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規(guī)格： 48T/96T

貯藏：2-8℃,避光防潮保存
有效期：6個(gè)月

用途：本產(chǎn)品僅供科研，不能用于臨床診斷

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小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒說明書性能:
準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi),板間變異系數(shù)均小于15%。

小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒說明書操作方法：

一、雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

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二、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；

4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.zui后一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

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