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當前位置:上海通蔚生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細胞因子的檢測方法
一、細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質(zhì)的統(tǒng)稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調(diào)節(jié)、炎癥應答、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監(jiān)測方面具有重要價值。
但是,由于細胞因子在體內(nèi)的含量甚微,給細胞因子的檢測帶來困維,細胞因子的檢4.細胞病變抑制法病毒可造成靶細胞的損傷,干擾素等則可抑制病毒所導致的細胞病變,因此可利用細胞病變抑制法檢測這類因子。
二、免疫學檢測法
細胞因子均為蛋白或多肽,具有較強的抗原性。隨著重組細胞因子的出現(xiàn),可較方便地獲得細胞因子的特異性抗血清或單克隆抗體,因此可利用抗原抗體特異性反應的特性,用免疫學技術(shù)定量檢測細胞因子。盡管細胞因子種類繁多,只要獲得了針對某一因子的特異性抗體(包括多克隆抗體或單克隆抗體)均可采用相似的技術(shù)開展工作。常用的方法包括ELISA、RIA及免疫印跡法。目前,幾乎所有常見細胞因子的檢測試劑盒均有商品供應。此外還可利用酶標或熒光標記的抗細胞因子單克隆抗體,原位檢測因子在細胞內(nèi)的合成及分布情況,如近來來發(fā)展起來的細胞內(nèi)染色法和酶聯(lián)免疫斑點(ELISPOT)技術(shù)等。免疫學檢測法可直接測定樣品中特定細胞因子的含量(用ng/ml表示),為大規(guī)模檢測臨床病人血清中細胞因子的含量提供了方便。本法僅測定細胞因子的抗原性,與該因子活性不一定相平行,因此要了解細胞因子的生物學效應,必須結(jié)合生物學檢測法。
三、分子生物學方法
這是一類利用細胞因子的基因探針檢測特定細胞因子基因表達的技術(shù)。目前所有*的細胞因子的基因均已克隆化,故能較容易地得到某一細胞因子的cDNA探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細胞因子mRNA表達的方法多種多樣,常使用斑點雜交、Northern blot、逆轉(zhuǎn)錄PCR,細胞或組織原位雜交等。實驗的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測物(提取的mRNA樣品或細胞/組織標本)。核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標記物(如*等)標記并與目的基因互補的DNA片段或單鏈DNA、RNA。根據(jù)其來源可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點雜交及Northern blot,而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術(shù)的應用已經(jīng)程序化,以cDNA探針為例主要包括:①質(zhì)粒DNA的提?。虎诎蠨NA片段的分離;③靶DNA片段標記;④待測樣品mrna的提??;⑤標記cDNA探針對待檢樣品的雜交;⑥放射自顯影或顯色分析。近年來出現(xiàn)的RT-PCR檢測特異性mRNA的方法也廣泛用于細胞因子研究領域。該法具有靈敏、快速等優(yōu)點,甚至從1~10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA。
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