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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA試劑盒試驗差錯留意點(diǎn)簡介

時間:2018-3-12閱讀:208
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ELISA試劑盒能夠簡略、地從瓊脂糖凝膠上純化收回DNA段,一起除掉蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)??墒栈?00bp–40 kb DNA段,可純化高達(dá)10μg的DNA段,收回率可達(dá)80%以上(<100bp或>10kb的DNA段收回率為30–50%)。運(yùn)用ELISA試劑盒收回的DNA可適用于各種慣例操作,包含酶切、PCR、測序、文庫挑選、銜接和轉(zhuǎn)化等各種分子生物學(xué)試驗。

 

ELISA試劑盒留意事項:
1、 不同廠家出產(chǎn)的試劑盒因出產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,必須依照所用試劑盒嚴(yán)厲操作,不然簡單發(fā)生檢測成果的不確定性.
2、 若不同批號試劑的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進(jìn)行穿插運(yùn)用,有可能呈現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等景象。
3、 加樣時樣品量差錯,關(guān)于陰或很陽的標(biāo)本影響不大,但對閾值鄰近的標(biāo)本影響*,主張校正加樣器。
4、 反應(yīng)時間的差錯,做很多標(biāo)本時,孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
5、 因為滴瓶的精密性必定不如加樣器,不掃除不同滴頭滴量的差錯。別的滴加過程中是否發(fā)生氣泡、速度是否均勻,是否顫動等影響液量的要素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時應(yīng)運(yùn)用加樣器。
6、 肉眼調(diào)查稍顯色,酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實際工作中是難以避免的,肉眼目測成果不可靠,應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
7、 由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽性原因多為操作過程中漏加試劑等有關(guān)。
8、 臨界值鄰近標(biāo)本動搖為正常現(xiàn)象,任何試劑均不可避免。能夠考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。
9、 ELISA試劑盒閾值鄰近實際上是個灰區(qū)(gray scale),不能截然分為陰性、陽性,國外廠家均要求對這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢,以次數(shù)多者為準(zhǔn),如一次陽兩次陰zui后判為陰,但實際上是否為陰不好說,只有判為可疑,臨床上能夠讓患者過一段時間后再測。

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