1.吸除培育瓶內(nèi)舊培育液。
2.參加無菌pbs洗液（5-8mL）輕輕潮濕細胞，稀釋多余的培育基，之后吸走洗液，動作要輕，不可吹打到細胞。
3.向瓶內(nèi)參加含0.25%EDTA的*混合液少量，以能覆滿瓶底為限。 
4.置溫箱中2~5分鐘，一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細胞質回縮，細胞間隙增大后，細胞變圓，比較松動后，當即停止消化。
5.參加該細胞對應的培育基6mL（T25培育瓶）或12mL（T75培育瓶）停止消化。
6.用吸管通過汲取的培育基輕輕重復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離構成細胞懸液。吹打時應盡量以少的次數(shù)將細胞從壁上吹下，不僅要操控吹打的力度、次數(shù)，還要注意要將細胞盡可能吹成單個。這樣既能減少死細胞，又能便于細胞再次均勻貼壁成長。
7.根據(jù)傳代比例，將細胞懸液分瓶，再彌補培育基后，靜置于溫箱培育，直止貼壁。
貼壁細胞在培育瓶長成致密單層后，持續(xù)成長的空間缺乏，培育基中的養(yǎng)分成份也消耗較多，一起代謝廢物也有較多堆積，需求分瓶培育，對細胞進行傳代擴增。對于貼壁不太緊的細胞如293，可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細胞如CHO，則需求以*消化后再吹散分瓶。以筆者的經(jīng)歷，以輕吹或加培育液后輕搖可下較好，但對于經(jīng)歷不太充沛的實驗者而言是較難判斷把握的。