實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各ELISA試劑盒均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100 (臨用前配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。

3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400 /每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100 ，加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。

5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止)。

7.每孔加終止溶液50 ，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色，終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。 

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(值)。