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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>收到細(xì)胞后的培養(yǎng)方法
1、收到細(xì)胞,請檢查瓶子是否有決裂,培育基是否漏出,是否污濁,如有請趕快聯(lián)絡(luò)。
2、收到細(xì)胞,如包裝無缺,請在顯微鏡下調(diào)查細(xì)胞。,因為運送過程中的問題,細(xì)胞培育瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中掉落下來,顯微鏡下調(diào)查會呈現(xiàn)細(xì)胞懸浮的狀況,呈現(xiàn)此狀況時,請不要翻開細(xì)胞培育瓶,先不要把培育基吸出來。應(yīng)立即將培育瓶置于細(xì)胞培育箱里停止3-5小時左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下調(diào)查,此刻大都細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法判定細(xì)胞生機,如臺盼藍染色證實細(xì)胞生機正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時如無異常狀況 ,請在顯微鏡下調(diào)查細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超越80%匯合度時,用75%酒精(主張裝備75%酒精的水也是滅菌超純水。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)厲無菌操作:然后翻開蓋子,先用槍頭把培育基吸出10ML左右,放在離心管里,然后瓶口過火,(禁止直接傾倒),這樣能夠保證不污染,再用10ML的移液管,將剩下的培育基悉數(shù)吸出,放于離心管中,培育瓶中只剩下5-10ML左右培育液持續(xù)培育就能夠了):超越80%匯合度時,請按細(xì)胞培育條件傳代培育。
如為懸浮細(xì)胞,吸出培育液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3-5分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培育基懸浮細(xì)胞后移回培育瓶。
4,將培育瓶置于37℃培育箱中培育,蓋子悄悄擰松。吸出的培育基能夠保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。第二天換液時,要制造新鮮的培育基和進口胎牛血清。這樣對細(xì)胞成長更好。不要再用咱們原瓶的培育基了。
5 、24小時后,細(xì)胞形狀已康復(fù)并貼滿瓶壁,就能夠傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培育瓶里的培育基倒去,加3-5ml(以能掩蓋細(xì)胞成長面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的*消化,消化時刻以詳細(xì)細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超越5分鐘。能夠放入37℃培育箱消化。悄悄晃動瓶壁,見細(xì)胞掉落下來,參加3-5ml培育基停止消化。用移液管悄悄吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*掉落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決議分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些成長較快的細(xì)胞則能夠多傳幾瓶,以詳細(xì)細(xì)胞和經(jīng)歷為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管悄悄吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)厲無菌操作。換液時,換新的細(xì)胞培育瓶和換新鮮的培育液和進口胎牛血清,37度 5%CO2 培育
7. 收到細(xì)胞后,請鏡下調(diào)查細(xì)胞,用恰當(dāng)方法處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請離心搜集細(xì)胞,接種到一個新的培育瓶中。棄掉原液,運用新鮮制造的培育基,運用進口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時 血清濃度能夠加到15%去培育。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度仍是在10%。
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