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真菌的培育方法
1、小塊瓊脂玻片培育法
用無菌操作法將制好的待用瓊脂平板用無菌接種針或接種環(huán)切成大約1cm2的方塊,將其放置于滅菌的載玻片上。將標(biāo)本或待檢菌接種于瓊脂塊四周邊緣靠上方部位,然后用無菌鑷子取一無菌的蓋玻片蓋在瓊脂上。在無菌平皿內(nèi)放入少量無菌水和一個(gè)無菌U形(或V形)玻璃棒。將此載玻片置于玻璃棒上,蓋上平皿蓋培育。每日用肉眼和顯微鏡調(diào)查孢子和菌絲的特色。
2、鋼環(huán)法
(1)資料:白假絲酵母菌、沙保弱培育基、無菌玻片、蓋玻片、鋼環(huán)(帶有缺 口)、白臘。
(2)方法
①用無菌鑷子取無菌小培育鋼環(huán),環(huán)的兩面別離蘸取熔化的固體白臘,平置于無菌載玻片上,另取一無菌蓋玻片,在酒精燈火焰上加熱后覆蓋于鋼環(huán)上,待冷后,小培育鋼圈即被固定于載玻片與蓋玻片之間。
②用毛細(xì)滴管吸取消融的培育基,從鋼環(huán)上端孔注入,注入量占容積的1/2即可。
③培育基冷卻凝結(jié)后,用接種針挑取資料,由上端孔接種于環(huán)內(nèi)培育基上。
④置濕盒內(nèi),室溫或37℃下培育2—3d后,逐日調(diào)查,鏡下可接連看到真菌成長過程及菌絲、孢子等特征,一般7d左右即可長好。
⑤也可不用小培育鋼環(huán),直接將消融的培育基滴于無菌玻片上,待冷凝后從周邊接種資料,用蓋玻片覆蓋后培育,在顯微鏡下接連調(diào)查成長狀況。
(3)成果:鏡下調(diào)查可見到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌絲。
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