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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>ELISA試劑盒概念及前史
一、ELISA試劑盒概念及前史
ELISA(Enzyme-linked Immunosorbent assy),中文名:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。1971年由瑞典學(xué)者Ergvail和Perlmann,荷蘭Van Weerman和Schuurs等人發(fā)明,時(shí)至今日ELISA技術(shù)已經(jīng)成為免疫學(xué)中zui為經(jīng)典的技術(shù)之一。其基本原理是將抗原/抗體固定在固相載體上,通過(guò)抗原抗體結(jié)合特性,由酶介導(dǎo)催化擴(kuò)展信號(hào),通過(guò)對(duì)信號(hào)值記錄剖析進(jìn)行待檢物的測(cè)定(現(xiàn)在首要用酶標(biāo)板)。酶的催化功率很高,所以ELISA系統(tǒng)的高靈敏性是其廣受歡迎的重要原因;對(duì)檢測(cè)成果更高靈敏度一直是業(yè)界科研工作者孜孜不倦的尋求,人們一直在尋找新的擴(kuò)展信號(hào)出現(xiàn)系統(tǒng),新的檢測(cè)信號(hào)接收擴(kuò)展核算儀器,但是就現(xiàn)在來(lái)說(shuō)HRP-TMB系統(tǒng)仍然是干流,OD450/OD630酶標(biāo)儀仍然是首要檢測(cè)儀器,其他系統(tǒng)因各自的缺陷運(yùn)用較少。
現(xiàn)在,ELISA相關(guān)試劑和耗材都已經(jīng)商品化,科研工作者運(yùn)用起來(lái)都很便利。ELISA的首要流程如下:包被(抗原或抗體固相化),封閉,洗刷,加樣洗刷,加底物,讀數(shù)。下文介紹其分類及原理。
二、ELISA分類及其原理示意圖
ELISA根據(jù)不同標(biāo)準(zhǔn),其分類方法也不盡相同,本文根據(jù)其操作流程不同將其分為四類:直接ELISA、直接ELISA、夾心ELISA和競(jìng)賽克制ELISA。
1. 直接ELISA試劑盒:所謂直接ELISA就是指抗原(Antigen,簡(jiǎn)寫(xiě)Ag)包被于固相載體,封閉后參與酶符號(hào)抗體,洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體,參與底物顯色,顯色深淺與包被抗原量和酶標(biāo)抗體量成正比。所謂的“直接”是指在固相載體上參與酶標(biāo)抗體之后,直接加底物顯色,直接是指引入酶的進(jìn)程是否“直接”。此為zui簡(jiǎn)略的ELISA,常用于抗原活性檢測(cè)或符號(hào)抗體的效價(jià)和質(zhì)量的檢測(cè)。
2. 直接ELISA
直接ELISA與直接ELISA的區(qū)別是抗原包被于固相載體后,不是直接加酶標(biāo)抗體,而是先加抗體,洗刷后再參與酶標(biāo)的抗抗體(酶標(biāo)二抗),然后洗刷參與底物顯色。所謂直接和直接是針對(duì)酶標(biāo)抗體是“直接”還是“直接”引入的而言的,引入了酶標(biāo)二抗后檢測(cè)信號(hào)將擴(kuò)展數(shù)十倍。
直接ELISA首要適用范圍:抗體效價(jià)檢測(cè),單抗挑選,臨床上許多定性檢測(cè)等,直接ELISA應(yīng)用十分廣泛,也是zui重要的一種ELISA。
3. 夾心ELISA試劑盒
夾心ELISA是把待檢物放中心,結(jié)構(gòu)上像三明治,英文名又稱sandwich ELISA。夾心ELISA分為直接夾心ELISA和直接夾心ELISA; 直接夾心ELISA又分為雙抗體夾心ELISA和雙抗原夾心ELISA。
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