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elisa試劑盒TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達(dá),隨即逐漸削弱,至2小時(shí)后即可*衰退至無(wú)色。
TMB 的中止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)中止。這類中止劑尚能使藍(lán)色堅(jiān)持較長(zhǎng)時(shí)間(12-24 小時(shí))不褪,是目視判別的出色中止劑。
此外,elisa試劑盒各類酸性中止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀,通常指于測(cè)讀ELISA 效果吸光度的光度計(jì)。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度和可測(cè)范圍、線性等等。
優(yōu)異的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可準(zhǔn)確到0.001,準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安頓在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15 -30℃ ,運(yùn)用前先預(yù)熱儀器 15-30 分鐘,測(cè)讀效果更安穩(wěn)。
測(cè)讀A值時(shí),要選用產(chǎn)品的活絡(luò)吸收峰,如OPD用492nm 波長(zhǎng)。elisa試劑盒有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀,即每孔先后測(cè)讀兩次,*次在zui適波長(zhǎng)(W1),第2次在不活絡(luò)波長(zhǎng)(W2),兩次測(cè)定間不 移動(dòng)ELISA 板的方位,畢竟測(cè)得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等構(gòu)成的光煩擾。
肉眼判別效果時(shí),顯色淺不易調(diào)查,影響效果的準(zhǔn)確性,有必要運(yùn)用酶標(biāo)儀檢測(cè),以保效果一致性。
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