ELISA試劑盒是免疫確診中的一項新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所導(dǎo)致的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫確診。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，依據(jù)現(xiàn)已運用的成果，以為ELISA法具有活絡(luò)、特異、簡單、迅速、安穩(wěn)及易于自動化操作等特點。不只適用于臨床標(biāo)本的查看，并且因為一天之內(nèi)能夠查看幾百乃至上千份標(biāo)本,因而，也適合于血清流行病學(xué)查詢。本法不只能夠用來測定抗體，并且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種前期確診的杰出方法。
因而ELISA試劑盒可概括四個方面：
1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
2、研討抗酶抗體的合成。
3、閃現(xiàn)微量的免疫沉淀反響。
4、定量檢查體液中抗原或抗體成份。
操作流程如下：
（1）待測樣品孔中每孔參加待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，參加純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反響液，用洗刷液過洗一遍（將洗刷液注滿板孔后，即甩去），以后將洗刷液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖擺。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗刷3-4次。
（4）陰性對照孔每孔參加PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔參加1：500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1：5000稀釋的HRP-符號的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，ELISA試劑盒悄悄混勻10s，置37℃暗處反響15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4停止反響。
（12）別離測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終究測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等形成的光攪擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，核算S/N值。S/N≥2.1為陽性斷定規(guī)范。
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