ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的聯(lián)絡(luò)只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標本，其間的抗原并不是都有對等的和固相抗聯(lián)絡(luò)的時機，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
在一定時間內(nèi)，陰性孔可堅持無色，而陽性孔則隨時間的延伸而呈色加強。恰當前進溫度有助于加速顯色進行。
在定量測定中，參與底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)矩力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間通常不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯況恰當縮短或延伸反應(yīng)時間，及時區(qū)分。
這是一個逐，因而需經(jīng)渙散才干抵達反應(yīng)的結(jié)尾。在這以后參與的酶符號抗體與固相抗原的聯(lián)絡(luò)也相同如此。這便是為何ELISA查看試劑盒反應(yīng)老是需要一定時間的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。
ELISA試劑盒測定技能的展開首要在于方法學的展開，而方法學的展開依托于試劑生產(chǎn)技能不斷前進更新和型符號物的運用。
37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體聯(lián)絡(luò)的適合溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學研討時，實驗標明，兩次抗原抗體反應(yīng)通常在37℃經(jīng)1-2小時，商品的生成可達。
可前進反應(yīng)的溫度，有些實驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時間太長，在ELISA查看試劑盒中通常不予選用。
反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的要素。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)查詢效果。
但為保證實驗效果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)矩的恰當時間閱讀效果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐漸削弱，至2小時后即可*闌珊至無色。TMB的中止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)中止。這類中止劑尚能使藍色堅持較長時間(12-24小時)不褪，是目視區(qū)分的出色中止劑。此外，各類酸性中止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
ELISA試劑盒分子生物學正在并終究肯定會讓對悉數(shù)生命科學有一個悉數(shù)而*的知道，其對免疫測定技能展開的影響也是直接而又有效的，對曾經(jīng)一些難以查看的生物活性物質(zhì)的測定，并且大大前進了查看的靈敏度和特異性。