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上海酶聯(lián)生物研究所

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魚Bcl-2相關X(BAX)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

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魚Bcl-2相關X(BAX)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:
0.2μg/L -9μg/L
使用目的:
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關液體樣本中 Bcl-2相關   X(BAX)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚  Bcl-2 相關 X(BAX)。用純化的魚Bcl-2相關 XBAX)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Bcl-2(BAX),再與 HRP標記的  Bcl-2相關  X (BAX)抗體    ,形成抗體-抗原-酶相關  X標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 Bcl-2相關  X (BAX)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中魚 Bcl-2 相關 X (BAX)濃度。
試劑盒組成

30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2   酶標試劑
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標準品(16μg/L)
標準品稀釋液
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
標本要
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。魚Bcl-2相關X(BAX)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(HRP)活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
8μg/L
4μg/L
2μg/L
1μg/L
0.5μg/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  5號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  4號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  3號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  2號標準品加入  150μl標準品稀釋液
2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后

37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜
重復 5次,拍干。
30秒后棄去,如此
加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
魚Bcl-2相關X(BAX)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書操作程序總:
計算
以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與  OD值計算出標

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