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上海弘順生物科技有限公司
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閱讀:30發(fā)布時(shí)間:2016-2-26
CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞培養(yǎng)條件接收后的操作流程與注意事項(xiàng):
1、如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決
2、貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(zui高不能超過(guò)20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度,考慮*消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3、生長(zhǎng)不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長(zhǎng),可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1、吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2-3ml 0.25%*進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?-2min)
2、鏡下觀(guān)察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ?,加6-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散
3、取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況,CNE-1人鼻咽癌細(xì)胞培養(yǎng)條件定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))
1、收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí))
2、貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)
3、如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并實(shí)驗(yàn)室
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