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上海弘順生物科技有限公司
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閱讀:151發(fā)布時間:2015-11-30
細胞名:NCM460;正常結(jié)腸上皮細胞培養(yǎng)環(huán)境
細胞別名:NCM460細胞;正常結(jié)腸上皮細胞 正常結(jié)腸上皮細胞;NCM460細胞
生物安全水平:1
培養(yǎng)基&血清:見培養(yǎng)條件
生物體:人類(人)
細胞接收后的操作流程與注意事項:
1、如果細胞為貼壁細胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請及時實驗室技術(shù)人員會跟進解決
2、貼壁細胞生長緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(zui高不能超過20%),或可根據(jù)該細胞生長密度,考慮*消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3、生長不均:貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)
1、吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2-3ml 0.25%*進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?-2min)
2、鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ?,加6-8ml*培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,NCM460;正常結(jié)腸上皮細胞培養(yǎng)環(huán)境盡量把細胞層吹落,吹散
3、取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存
特別注意:(如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))
1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時)
2、貼壁細胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)
3、如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并實驗室
細胞特性:貼壁
培養(yǎng)條件:GIBCO(1640+15%胎牛血清)+20ng/ml EGF
培養(yǎng)環(huán)境:95%空氣;5%二氧化碳(CO2)
溫度:37.0℃
保存:凍存血清:30%胎牛血清和10%二甲基亞砜(DMSO)*培養(yǎng)基
儲存溫度:液氮
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