細(xì)胞名：hCMEC-D3；永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞組織
細(xì)胞別名：hCMEC-D3細(xì)胞；永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞；hCMEC-D3細(xì)胞
生物安全水平：1
培養(yǎng)基&血清：見培養(yǎng)條件
生物體：人類（人）
來源：器官：大腦
組織：血腦屏障
細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)：
1、如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細(xì)胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會跟進(jìn)解決
2、貼壁細(xì)胞生長緩慢；適當(dāng)提高血清濃度（zui高不能超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長密度，考慮*消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3、生長不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵照無菌操作）
1、吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2-3ml 0.25%*進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?-2min）
2、鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ?，加6-8ml*培養(yǎng)基，hCMEC-D3；永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞組織輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散
3、取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）
1、收到細(xì)胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清，（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時）
2、貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)
3、如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并實(shí)驗(yàn)室
培養(yǎng)條件：GIBCO(1640+10%胎牛血清)
培養(yǎng)環(huán)境：95%空氣；5%二氧化碳（CO2）
溫度：37.0℃
保存：凍存血清：90%*培養(yǎng)基；10%二甲基亞砜（DMSO）
儲存溫度：液氮
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