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酶聯(lián)(上海)生物試劑科技有限公司資料大小
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323次因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊。例如,在檢測抗DNA抗體時,動物ELISA試劑盒需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴氨酸、*等作預(yù)包被,也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入*化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相表面??剐牧字贵w的動物ELISA試劑盒一般采用這種包被方式。
載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。
蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,動物ELISA試劑盒可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被,其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。
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