抗體的選擇指導(dǎo)和保存介紹
當(dāng)我們要檢測(cè)目的蛋白在組織中表達(dá)情況的時(shí)候，如何選擇適合我們實(shí)驗(yàn)需要的抗體，并恰當(dāng)保存使用，是每個(gè)科研人員需要細(xì)心考慮的。抗體種類繁多，品牌眾 多，技術(shù)參數(shù)不一，價(jià)格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購(gòu)買到高質(zhì)量?jī)r(jià)格合適的抗體，并準(zhǔn)確地做出我們想要的結(jié)果，其中有很多細(xì)節(jié)需要注意。
一、怎樣選擇適合你實(shí)驗(yàn)需要的抗體？
1. 一抗選擇要點(diǎn)
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。
（2）確定你的實(shí)驗(yàn)類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說(shuō)明書(shū)都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說(shuō)明 書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)列出的已驗(yàn)證的類型來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的 抗體。
（3）確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種物種實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)列出已驗(yàn)證的種屬來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。
（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體，待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過(guò)程中是否會(huì)變性，蛋白空間構(gòu)象的改變，會(huì)影響抗體的免疫親和反應(yīng)。
（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等避免）。
2. 二抗選擇要點(diǎn)
（1）種屬來(lái)源。主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買二抗來(lái)源，如一抗是小鼠來(lái)源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)，而免疫熒光染色就需要購(gòu)買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
二、抗體的穩(wěn)定性
1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長(zhǎng)期進(jìn)化的結(jié)果?？贵w是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。
2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時(shí)間溫度達(dá)到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊，保持應(yīng)有的活性。
3. 抗體的純度。采用*的抗體純化技術(shù)，確保抗體產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。
三、怎樣確定抗體購(gòu)買渠道和品牌？
國(guó)外抗體品牌的質(zhì)量一般沒(méi)問(wèn)題，但價(jià)格較貴，而且很多抗體品牌本身不生產(chǎn)抗體，所以能找到OEM抗體生產(chǎn)商生產(chǎn)的*抗體，隨著網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的越來(lái)越普及，我們自己就可以通 過(guò)國(guó)內(nèi)外的相關(guān)來(lái)檢索，來(lái)查找我們所需要的產(chǎn)品資料。
四、怎樣保存已獲得的抗體？
抗體無(wú)論是保存還是運(yùn)輸都應(yīng)盡可能地避免反復(fù)凍融，收到抗體后請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，對(duì)抗體進(jìn)行分裝，避免同一管抗體反復(fù)凍融（反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體空間結(jié)構(gòu)變 性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力）?？贵w保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當(dāng)，抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。 請(qǐng)謹(jǐn)記，無(wú)論何時(shí)請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的保存條件正確處理和保存抗體。
1. 收到抗體后，請(qǐng)務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，（無(wú)論是液體還是凍干粉狀態(tài)），再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請(qǐng)延長(zhǎng) 離心時(shí)間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來(lái)）?？贵w一般使用特制的儲(chǔ)存管，只有在12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下 來(lái)（即使是在10000rpm離心也會(huì)離心不*，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）。
2. 對(duì)于ProSci大部分抗體，比較合適的保存方式是，分裝后保存在-20℃或者-80℃。
（1）對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說(shuō)，保存在-20℃就*足夠了，沒(méi)有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)更好。
（2）分裝可以zui大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害，同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
（3）分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，zui少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。
（4）復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來(lái)。
（5）抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，4℃保存盡量不要超過(guò)1天。
（6）避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復(fù)凍融。
3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對(duì)抗體活性沒(méi)有影響。
4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過(guò)程需要1~2周的時(shí)間，所以是在低溫4℃的條件下來(lái)完成的。
4℃運(yùn)輸zui主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來(lái)的，為了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過(guò)程），所以運(yùn)輸過(guò)程中避免干冰運(yùn)輸。
關(guān)于*（sodium azide）的使用：
為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度0.02% (w/v)）。ProSci的絕大部分抗體已經(jīng)含有了0.02％-0.05%的*，在說(shuō)明書(shū)的儲(chǔ)存緩沖液中有標(biāo)明。
注：*的去除方式
可以通過(guò)凝膠電泳或過(guò)濾的方式去除，IgG的分子量是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除。
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