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單抗制備-細胞融合篩選過程中遇到的問題及對策

閱讀:745發(fā)布時間:2015-11-7

單抗制備-細胞融合篩選過程中遇到的問題及對策


1,融合率低,陽性孔少
①免疫的問題。由于免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱,效價低。
②融合過程中溫度、時間、PEG分子量,作用時間等。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞,有無組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細胞生長狀態(tài)是否完好,細胞是否渾圓,透亮,成對數(shù)生長。


2,單抗親和力整體低
①免疫的問題。免疫途徑不當或者免疫原問題。
②融合細胞篩選過程出現(xiàn)遺漏,篩選方法不當或檢測方法不當,造成沒有篩到高親和力的融合細胞。
③由于亞克隆細胞生長環(huán)境不合適,導致融合細胞染色體丟失,分泌特性改變,親和力從高變低,這時就需要及時更換培養(yǎng)液,當細胞增長到一定密度的時候,培養(yǎng)基就開始變顏色,影響融合細胞的生長,造成染色體丟失;控制好細胞的密度,密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,影響融合細胞的生長,造成染色體丟失;不要過于頻繁操作細胞,當細胞生長密度不是很大的時候,不要頻繁操作,否則細胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化。
操作細致,防止細胞被支原體等微生物污染。

3,抗體親和力從高變低
①沒有及時更換培養(yǎng)液,當細胞增長到一定密度的時候,培養(yǎng)基就開始變顏色,影響融合細胞的生長,造成染色體丟失或者性狀改變。
②控制好細胞的密度,密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗,影響融合細胞的生長,造成染色體丟失或者性狀改變。
③過于頻繁操作細胞,當細胞生長密度不是很大的時候,不要頻繁操作,否則細胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化。
④細胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數(shù)超過5次,導致細胞生長環(huán)境經(jīng)常被改變,弱的陽性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變。

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