單抗制備-細(xì)胞融合篩選過程中遇到的問題及對策
1，融合率低，陽性孔少
①免疫的問題。由于免疫原性不強(qiáng)或者免疫途徑不當(dāng)造成免疫弱，效價低。
②融合過程中溫度、時間、PEG分子量，作用時間等。
③脾細(xì)胞是否取出了足夠多的細(xì)胞，有無組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細(xì)胞生長狀態(tài)是否完好，細(xì)胞是否渾圓，透亮，成對數(shù)生長。
2，單抗親和力整體低
①免疫的問題。免疫途徑不當(dāng)或者免疫原問題。
②融合細(xì)胞篩選過程出現(xiàn)遺漏，篩選方法不當(dāng)或檢測方法不當(dāng)，造成沒有篩到高親和力的融合細(xì)胞。
③由于亞克隆細(xì)胞生長環(huán)境不合適，導(dǎo)致融合細(xì)胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時就需要及時更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞增長到一定密度的時候，培養(yǎng)基就開始變顏色，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失；控制好細(xì)胞的密度，密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失；不要過于頻繁操作細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化。
操作細(xì)致，防止細(xì)胞被支原體等微生物污染。
3，抗體親和力從高變低
①沒有及時更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞增長到一定密度的時候，培養(yǎng)基就開始變顏色，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失或者性狀改變。
②控制好細(xì)胞的密度，密度過大使新加入的培養(yǎng)基不至于很快被消耗，影響融合細(xì)胞的生長，造成染色體丟失或者性狀改變。
③過于頻繁操作細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細(xì)胞容易出現(xiàn)死亡或者生長形態(tài)發(fā)生明顯變化。
④細(xì)胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數(shù)超過5次，導(dǎo)致細(xì)胞生長環(huán)境經(jīng)常被改變，弱的陽性雜交瘤細(xì)胞染色體丟失或者性狀改變。
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