產(chǎn)品說明 過氧化物(如過氧化氫H2O2)是在氧化應(yīng)激條件下形成的一種重要的活性氧。過氧化物含量高可能與衰老、哮喘、糖尿病、動脈漿樣硬化、白內(nèi)障、關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)組織退化等疾病有關(guān)。 在科研和藥物研發(fā)中，方便、直接、自動化的過氧化物含量檢測手段是zui為理想的。本公司研制的過氧化物檢測試劑盒可直接用于生物樣品的檢測，免除了預(yù)處理過程。檢測原理是利用試劑中的Fe2+ 被樣品中的過氧化物氧化為Fe3+，并能與二甲酚橙反應(yīng)生成紫色復(fù)合物的特性，在波長540-610nm(585nm)下檢測，其顏色深淺程度與樣品中過氧化物的含量成正比。通過配方的改良，充分減小了未處理的樣品中其它雜質(zhì)的干擾。 產(chǎn)品特點(diǎn) 靈敏、準(zhǔn)確：檢測范圍在0.4 – 100 μM (14 – 3400 ng/mL)。 簡單、高通量：整個測試過程只需加入一種工作試劑并反應(yīng)30分鐘。利用96孔板高通量檢測，每天可以測試上千份樣本。 適用范圍 1． 檢測生物樣品(如，血清、血漿、尿液、細(xì)胞溶液和培養(yǎng)液)中過氧化物含量。 2．適用于藥理學(xué)研究，檢測藥物對過氧化物代謝的影響。 試劑盒規(guī)格(96孔板供250份測試) 試劑A：1 mL 試劑B：50 mL 標(biāo)準(zhǔn)品：1 mL 3% 雙氧水(H2O2) 儲藏條件：在室溫下運(yùn)輸, 4°C下保存。 注意事項：本產(chǎn)品僅供研究用。使用過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循實(shí)驗安全措施。 96孔板檢測步驟 樣本處理：一些化學(xué)成分會干擾檢測，在樣本準(zhǔn)備時要避免接觸。這類物質(zhì)包括：抗壞血酸、乙二胺四乙酸、肝磷脂、二甲基亞砜(>0.02%)，(>0.6%)，SDS(>0.12%)，氨基丁三醇(>8mM)和乙醇(>0.4%)。 新鮮的樣品可以馬上用于檢測，或在-20°C下保存，不要反復(fù)凍融。如果樣品出現(xiàn)顆粒，應(yīng)離心后取上清進(jìn)行檢測。 試劑準(zhǔn)備：檢測前所有試劑須放置至室溫。每孔需工作試劑100 μL，按試劑A：試劑B = 1：100的比例配制足量工作試劑。 1. 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)在檢測前現(xiàn)配。在1.5mL 的離心管中混合10 μL 3%的雙氧水和990μL 的水。再取混合后的溶液5μL 與1465μL水混合。zui終的雙氧水的濃度為30 μM(標(biāo)注“預(yù)混合液”)，按下表比例將其稀釋。 2. 將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品各取40 μL，放入透明平底96孔板不同孔中。將200 μL工作試劑加入所有標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中。 3. 室溫下反應(yīng)30分鐘，在585nm(波長范圍540-610nm)處讀取吸光度。注：若極少數(shù)情況下加入試劑后產(chǎn)生沉淀，可將反應(yīng)液 | | 編號 | 預(yù)混合液+水 | 體積(μL) | 雙氧水(μM) | 1 | 100μL+0μL | 100 | 30 | 2 | 80μL+20μL | 100 | 24 | 3 | 60μL +40μL | 100 | 18 | 4 | 40μL+60μL | 100 | 12 | 5 | 30μL+70μL | 100 | 9 | 6 | 20μL+80μL | 100 | 6 | 7 | 10μL+90μL | 100 | 3 | 8 | 0μL+100μL | 100 | 0 |
轉(zhuǎn)入1.5毫升的離心管，14,000rpm離心2分鐘，再小心移取200 mL上清液至一干凈孔，讀OD值，乘以1.2校正體積因素。 濃度計算 用標(biāo)準(zhǔn)品OD值減去空白對照(水, 8號)OD值，以此值對雙氧水濃度作圖(見標(biāo)準(zhǔn)曲線)。 樣品：用樣品(OD值)減去空白對照(OD值)，以此OD差值對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出樣品過氧化物的濃度。 單位換算: 1 μM 雙氧水相當(dāng)于34 ng/mL 或 34 ppb 實(shí)驗必需品(未提供) 吸液用儀器及附件，96孔板和微孔板分析儀。 96孔板測試標(biāo)準(zhǔn)曲線 論文發(fā)表 [1]. Chi Li Yu et al (2008). A novel caffeine dehydrogenase in pseudomonas sp. strain CBB1 oxidizes caffeine to trimethyluric acid. J. Bacteriol. 190(2):772–776. [2]. Deshmane, S.L. et al (2009). Activation of the oxidative stress pathway by HIV-1 Vpr leads to induction of hypoxia-inducible factor 1alpha expression. J Biol Chem. 284(17):11364-11373. [3]. Giao, N.N. et al (2007). Water deficit induced pollen sSterility associated with a programmed cell death and oxidative stress in rice anthers. Proceedings the 2nd International Rice for the Future pp202-209. |
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