產(chǎn)品說明 該勻相檢測法只需將一種工作試劑加至細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)后即可測定熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長= 530 - 570 nm，發(fā)射波長= 590 - 620 nm）。CellQuanti-BlueTM試劑，與其它基于刃天青的檢測法（如Alamar Blue試劑）相同，采用的是氧化還原顯色劑刃天青，刃天青本身并沒有熒光性，但一旦被具有代謝活性的細(xì)胞還原，則會(huì)轉(zhuǎn)化生成一種強(qiáng)熒光產(chǎn)物（試鹵靈）。活細(xì)胞很容易還原這種無毒試劑，從而使熒光強(qiáng)度升高，因此可用熒光分光光度計(jì)或熒光分析儀方便地檢測。非活性細(xì)胞沒有代謝能力，因此不能還原該顯色劑。所以檢測中觀察到的熒光強(qiáng)度能夠準(zhǔn)確檢測活性細(xì)胞的數(shù)量。 本公司生產(chǎn)的CellQuanti-BlueTM試劑經(jīng)優(yōu)化處理，提高了敏感性、可重復(fù)性、穩(wěn)定性。這種基于細(xì)胞的勻相檢測法可在多孔板中完成。該試劑與所有培養(yǎng)基以及所有液體處理系統(tǒng)都兼容，可在96孔板和384孔板中進(jìn)行高通量篩選。適用范圍包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡。 產(chǎn)品特點(diǎn) 安全：非放射性檢測（參見3H-胸腺嘧啶核苷摻入法檢測）。 敏感且準(zhǔn)確：可準(zhǔn)確定量低至100個(gè)細(xì)胞。 ：采用96孔板和384孔板進(jìn)行高通量檢測，每天可同時(shí)處理成千上萬的樣品。 勻相且簡單：只需加入一種試劑的“混合-培養(yǎng)-測量”型檢測法。無需沖洗或試劑移取步驟。 高通量：在96孔板和384孔板中觀察到的Z’系數(shù)通常為0.6-0.9。采用高通量篩選液體處理系統(tǒng)該檢測易于自動(dòng)化。 適用范圍 細(xì)胞增殖: 細(xì)胞因子、生長因子和營養(yǎng)成分對(duì)活體細(xì)胞的影響。 細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡: 評(píng)價(jià)有毒化合物、抗癌抗體、 毒素和環(huán)境污染物等。 藥物鑒定: 高通量篩選抗癌藥物。 試劑盒規(guī)格 目錄 # | 測試 | 試劑 | CQBL-05K | 5,000 | 50 mL | CQBL-10K | 10,000 | 100 mL | CQBL-HTS | >50,000 | 自定義 |
對(duì)照試劑（Cat # CTTX-050）：50 mg皂素（需單獨(dú)訂購）。 儲(chǔ)存條件：CellQuanti-BlueTM 試劑對(duì)光敏感，應(yīng)在4°C下保存于試劑盒提供的棕色瓶內(nèi)。對(duì)照試劑在-20°C下保存。保質(zhì)期12個(gè)月。 預(yù)防措施：本產(chǎn)品僅供研究用。使用過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)安全措施。 檢測步驟 CellQuanti-BlueTM檢測是基于具有代謝活性的細(xì)胞能將非熒光試劑轉(zhuǎn)化成熒光產(chǎn)物的原理。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞而言，完成這種還原反應(yīng)需要1至5小時(shí)。然后用熒光分析儀定量測定產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度。雖然培養(yǎng)基大多含有酚紅，但酚紅并不會(huì)干擾檢測結(jié)果。技術(shù)要點(diǎn)中的所有數(shù)據(jù)都是在含有酚紅的培養(yǎng)基中測得的。 試劑制備: 注：使用前先將試劑放置至室溫。 | | 96孔板測定步驟： 1. 在黑色96孔組織培養(yǎng)板中培養(yǎng)細(xì)胞（80 mL）。典型的培養(yǎng)基含DMEM、10%胎牛血清和抗生素（*/*、*等）、氨基酸和其它營養(yǎng)物。不論是粘附細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞，都可進(jìn)行檢測。每孔的細(xì)胞數(shù)量可從100至80,000個(gè)之間不等。盡管本方案中使用80 mL，但培養(yǎng)體積可從50至150mL之間不等。除待測樣品外，還應(yīng)設(shè)定對(duì)照孔，對(duì)照孔的培養(yǎng)基應(yīng)不含細(xì)胞或細(xì)胞已經(jīng)有毒試劑（如0.1%皂素）處理過。 2. 加入待測化合物和對(duì)照品，培養(yǎng)細(xì)胞至所需的時(shí)間（通常一整夜）。建議一式兩份或一式三份進(jìn)行檢測?？蓪⒋郎y化合物和對(duì)照品（20 mL）加入到磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）或培養(yǎng)基中。用5 mLPBS（0.1%皂素）溶液方便地配制對(duì)照試劑。 3. 將CellQuanti-BlueTM 試劑放置至室溫。向每孔中加入10 mL該試劑（每100 mL 細(xì)胞培養(yǎng)液）?？筛鶕?jù)細(xì)胞培養(yǎng)液的體積調(diào)整所加試劑的體積。輕敲孔板使細(xì)胞與試劑混合，在37°C下培養(yǎng)1至5小時(shí)。 4. 用熒光分析儀測量每孔的熒光強(qiáng)度。如果采用的是Molecular Devices LJL分析儀，則應(yīng)使用若丹明濾光鏡（530nm激發(fā)濾片、590nm發(fā)射濾片和570nm分色鏡）。 384孔板測定步驟： 1. 在黑色384孔組織培養(yǎng)板中培養(yǎng)細(xì)胞（40 mL）。每孔的細(xì)胞數(shù)量可從100至20,000之間不等。盡管本方案中使用40 mL，但培養(yǎng)體積可從25至60mL之間不等。除待測樣品外，還應(yīng)設(shè)定對(duì)照孔，對(duì)照孔中的培養(yǎng)基應(yīng)不含細(xì)胞或細(xì)胞已經(jīng)有毒試劑（如0.1%皂素）處理過。 2. 加入待測化合物和對(duì)照品，培養(yǎng)細(xì)胞至所需的時(shí)間。建議一式兩份或一式三份進(jìn)行檢測。建議將10 mL體積的待測化合物加入到PBS溶液或培養(yǎng)基中。 3. 將CellQuanti-BlueTM 試劑放置至室溫。向每孔中加入5mL該試劑（每50 mL細(xì)胞培養(yǎng)液）。輕敲孔板使細(xì)胞與試劑混合，在37°C下培養(yǎng)1至5小時(shí)。 - 4. 用熒光分析儀測量每孔的熒光強(qiáng)度。如果采用的是Molecular Devices LJL分析儀，則應(yīng)使用若丹明濾光鏡（530nm激發(fā)濾片、590nm發(fā)射濾片和570nm分色鏡）。
總則 培養(yǎng)時(shí)間：培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞系。部分細(xì)胞系的代謝活性很強(qiáng)，因此其所需的培養(yǎng)時(shí)間比代謝活性稍弱的細(xì)胞系更短?？赏ㄟ^多次讀數(shù)輕松確定培養(yǎng)時(shí)間，如加入CellQuanti-BlueTM 試劑后每30分鐘讀取一次。一般來講，培養(yǎng)1至5小時(shí)就已足夠。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量很大時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間過長（如 >18小時(shí)）可能導(dǎo)致非線性熒光響應(yīng)。 細(xì)胞數(shù)量：一般來講，優(yōu)化后的 CellQuanti-BlueTM 試劑會(huì)隨著培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的增加表現(xiàn)出大范圍的線性熒光響應(yīng)。建議測定信噪比zui高的各孔的細(xì)胞數(shù)量。細(xì)胞數(shù)量可根據(jù)細(xì)胞連續(xù)稀釋而輕松確定。 對(duì)照品：盡管不是必需程序，但可以設(shè)定陽性對(duì)照品，即有細(xì)胞毒性或可促進(jìn)細(xì)胞增殖。皂素是一種有細(xì)胞毒性的試劑，可從本公司購買（參見技術(shù)要點(diǎn)圖2）。每次檢測都應(yīng)使用空白對(duì)照品，即不含細(xì)胞或所含細(xì)胞已經(jīng)0.1%皂素處理過的培養(yǎng)基。根據(jù)空白對(duì)照品可以確定背景熒光，數(shù)據(jù)分析時(shí)應(yīng)扣除背景熒光。 |
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